主权项 |
测定肝微粒体中NNK代谢物的液质联用方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)肝微粒体孵育体系的配制孵育:取离心管,依次加入孵育液B,孵育液A,所需浓度的NNK,补加磷酸盐缓冲溶液配成肝微粒体孵育体系;反应:将离心管置于37.0 ℃水浴中5 min,加入肝微粒体,轻摇孵育体系使之均匀后不再晃动,置于37.0 ℃水浴中静止反应30 min;(2)样品处理:取出反应产物,加入预冷的内标乙腈溶液终止反应,放于4℃冰箱中保存60 min使蛋白沉淀,3500 rpm离心10 min,取上清再于10000 rpm离心5 min,上清液过0.22 μm滤膜后进样2 μL分析;(3)样品分析,进行肝微粒体中NNK代谢物测定,具体条件如下:色谱条件:色谱柱: HILIC Silica柱;流动相:A:水(含10 mM甲酸铵),B:乙腈;流速:500 μL/min;洗脱方式:梯度洗脱;进样量:2 μL;柱温:26 ℃;质谱条件:电离模式:电喷雾电离(ESI);扫描模式:正离子扫描;检测方式:多反应监测(MRM);电喷雾电压(IS):5500 V;离子源温度(TEM):600 ℃;雾化气(GS1, N2):65 psi;辅助加热气(GS2 , N2):60 psi;气帘气(Curtain gas, CUR, N2):35 psi;碰撞气(Collision gas, CAD, N2):8 psi;驻留时间(Dwell Time):50 ms;入口电压EP(Entrance Potential):10 V;出口电压CXP(Collision Cell Exit Potential):12 V。 |