营养缺陷型重组体巴斯德BCG菌株及其在抗寄生虫导致的人体感染中的应用

摘要

本发明涉及一种重组体BCG牛结核杆菌的疫苗菌株，该菌株表达曼氏血吸虫Sm14蛋白(巴斯德BCGΔleuD/pΔK410-hsp60*-Sm14)。本发明的疫苗菌株是用来控制由寄生虫，特别是曼氏血吸虫所引起的感染。所述疫苗菌株是一种来源于巴斯德BCG亚-菌株在遗传转化后补充到亮氨酸的营养缺陷型菌株到亮氨酸的氨基酸其构造为pΔK410-hsp60*-Sm14。本发明显示了巴斯德BCGΔleuD/pΔK410-hsp60*-Sm14菌株在体内重组体Sm14抗原的基础上控制曼氏血吸虫感染的效果。

主权项

一种补充到亮氨酸并表达曼氏血吸虫Sm14蛋白(巴斯德rBCG ΔleuD/pΔK410‑hsp60*‑Sm14)的重组体营养缺陷型巴斯德BCG菌株，其根据以下步骤获得: (a) 通过PCR扩增的包含 Sm14表达盒的片段，所述Sm14表达盒包含修饰后的hsp 60*启动子，使用pAU5‑Sm14媒介物作为模板以及引物PSm14F (TAT ATA TAT ATA TAG GCG CCA CCA CAA CGA CGC GC – SEQ ID NO:3) e PSm14R (CGC GGG CGC CTT AGG ATG ATC GTT TAT A – SEQ ID NO:4); (b) 消化通过PCR和Nar1酶所获得的816 bp的hsp60*‑Sm14扩增子； (c) Hsp60*‑Sm14扩增子的克隆在 pUP410媒介物中使用Nar1酶消化并产生构造pUP410‑hsp60*‑Sm14； (d) 评价构造pUP410‑hsp60*‑Sm14在牝牛分枝杆菌中表达Sm14蛋白的能力； (e) 通过限制性核酸内切酶HindIII的消化从pUP410‑hsp60*‑Sm14移除耐卡那霉素基因； (f) 再‑环化没有卡那霉素编纂基因的pUP410‑hsp60*‑Sm14构造以产生一种pUP410‑hsp60*‑Sm14构造，用于转变巴斯德 BCG营养缺陷型菌株(BCG ΔleuD)，以及产生一种重组体营养缺陷型巴斯德BCG菌株补充到表达曼氏血吸虫Sm14蛋白(巴斯德BCG ΔleuD/pΔK410‑hsp60*‑Sm14)的亮氨酸中。