一种高稳定性藻蓝蛋白类融合荧光蛋白质的制备方法

摘要

本发明公开一种高稳定性藻蓝蛋白类融合荧光蛋白质的制备方法，属于分子生物学技术领域。包括以下步骤：1)将藻蓝蛋白脱辅基蛋白基因和麦芽糖结合蛋白融合，并与色基裂合酶基因(cpcE和cpcF)克隆到表达载体的第一个表达框，藻胆素生物合成酶基因(hoxl和pcyA)克隆到同一载体的第二个表达框，得到一个含有多个相关基因的表达质粒；2)将上述表达质粒转化大肠杆菌后，筛选得到高产菌，应用此工程菌发酵，经蛋白的分离纯化，得到荧光类融合藻蓝蛋白。本发明有以下优点：1.提高了重组荧光蛋白的水溶性和稳定性；2.缩短生产周期，节约能源，利用率高。

主权项

一种荧光类融合藻蓝蛋白的生物合成方法，其特征包括以下步骤：1)将藻蓝蛋白脱辅基蛋白基因和麦芽糖结合蛋白融合，并与色基裂合酶基因cpcE和cpcF克隆到表达载体的第一个表达框，藻胆素生物合成酶基因hox1和pcyA克隆到同一载体的第二个表达框，得到一个含有多个相关基因的表达质粒；2)将上述表达质粒转化大肠杆菌后，筛选得到高产菌，应用此工程菌发酵，经蛋白的分离纯化，得到荧光类融合藻蓝蛋白；所述工程菌发酵为：将筛选得到菌种于液体LB培养基中，以37℃震荡培养12小时，再以体积比5％的接种量转入发酵罐中发酵培养，诱导前培养温度设为37℃，转速随发酵时间由300‑500rpm递增；发酵开始4h后，菌体生长至对数期，以0.08g/(L·min)速率进行补料葡萄糖；发酵7h时将罐内温度缓慢降至25℃，然后加入诱导剂IPTG至终浓度1mmol/L，降低转速至150rpm，诱导培养10h。