一种制备帕立骨化醇的方法

摘要

本发明公开了一种制备治疗骨质疏松症药物帕立骨化醇的方法。以维生素D2为原料，经化学反应和生物反应步骤获得目标物。革除了昂贵毒性双羟基化试剂的使用，采用价廉有效氧化试剂高锰酸钾溶液的双羟基化断键成酮。在碱性试剂下异构化成烯烃，运用硼氢化试剂9-BBN，硼烷等试剂进行硼氢化反应，引入1位羟基，开环得到19-去甲维生素D2，以Pseudonocardia autotrophica SWJTUQL-3721021(自养假诺卡氏菌CGMCC 5098)为羟基化菌，用生物转化法进行25位的直接羟基化，经提取分离获得帕立骨化醇。本发明通过化学-生物转化结合的方法，将帕立骨化醇已知公开报道的27步反应缩短为9步反应，提高了总收率，缩短了工艺路线，为解决帕立骨化醇的工业制备提供一条新的工艺路线。

主权项

1.一种制备帕立骨化醇的方法，以维生素D₂为原料，采用如下的化学反应和生物反应步骤获得治疗骨质疏松症药物帕立骨化醇：1-α-羟基-19-去亚甲基维生素D₂(ix)：化学反应部分：高锰酸钾水溶液在-20℃下，以醇类溶剂溶解环化物(iii)：滴加浓度为5-20％的高锰酸钾水溶液，搅拌反应1-10小时最好3小时，浓缩去除水，残余物用同体积乙醇稀释；0℃下，加入10-20％的高碘酸钠水溶液，搅拌2-5小时，最好3小时，用等体积1-5个碳的氯代烷烃，1-5个碳的羧酸酯等萃取，浓缩至干，得到10羰基环化维生素D₂(iv)；在-78℃下，滴加非极性溶剂的强碱，加入三氟甲烷磺酸酐、N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺，得到烯醇基三氟甲烷磺酸酯(V)；用甲酸及醋酸钯还原得到1，10双键的环己烯衍生物(vi)，使用硼氢化试剂经碱性过氧化氢氧化得到1-羟基-19-去甲维生素D₂(vii)，采用低分子有机酸开环，洗涤后再经4％的氢氧化钠甲醇溶液水解得到1-羟基-10去甲维生素D₂(viii)；生物反应部分1-羟基-19-去甲维生素D₂(viii)作为底物用菌株CGMCC 5098在通气搅拌的状态下，在碳源、氮源、矿物盐的培养基中进行生物转化，发酵温度22-30℃，最好是27℃，pH范围6.5-7.5，最好是7.0，通气量在0.5-1.0v/v/min；将1-羟基-19-去甲维生素D₂(viii)作为底物加入到培养液中，底物浓度最好是1-15g/升，底物加入培养基的时间通常是在碳源将近消耗完时加入底物最佳，通常是常是菌株培养2天后加入底物；在继续上述的培养的过程中产生25位的羟基化生物转化，转化的时间取决于培养基的组成和菌株，通常继续培养1-7天，最好是4天；最后经固液分离，分别对菌丝和滤液用有机溶剂抽提，经硅胶柱层析，丙酮/水重结晶得到纯的得到目标产物1-羟基-25-羟基-19-去甲维生素D₂(ix)，即帕立骨化醇。