多拷贝牛肉风味肽表达基因及载体和重组毕赤酵母的构建

摘要

一种多拷贝牛肉风味肽表达基因及载体和重组毕赤酵母的构建方法。本发明涉及一种用分子生物技术在毕赤酵母中获得牛肉风味肽(Beefy Meaty Peptide，BMP)的方法，克服了现有技术提取或化学合成BMP的技术难度大、成本高、产量低等不足。根据毕赤酵母表达翻译的密码子偏爱性，设计出含有4拷贝的BMP表达基因的序列，并设计出必要的限制性酶切位点、6His和终止密码子。通过体外操作，不断的扩大BMP的拷贝数至16拷贝，并将其插入到表达载体pPIC9上，将pPIC9线性化后通过电转化的方法将目的片段——含16拷贝的BMP表达基因，重组于毕赤酵母的基因组上。通过发酵，甲醇诱导毕赤酵母得到高产量的BMP，并通过6His亲和柱Ni柱进行分离纯化。

主权项

一种含有4拷贝牛肉风味肽表达基因的片段，其序列如序列表序列1所示。