环孢霉素A半抗原的制备方法及环孢霉素A的酶联免疫定量检测试剂盒

摘要

本发明“环孢霉素A半抗原的制备方法及环孢霉素A的酶联免疫定量检测试剂盒”，属于医学检测试剂。本发明主要提供环孢霉素A半抗原的制备方方法及制备得到的环孢霉素A半抗原，采用该半抗原的环孢霉素A的酶联免疫定量检测试剂盒可以制作成板式酶标板以适应国内普及的检测设备，并且能保证检测灵敏度高，稳定性好，结果准确。

主权项

环孢霉素A半抗原的制备方法，步骤如下：(1)环孢霉素A按质量体积比3g∶1ml比例溶于嘧啶中，再逐滴加入与嘧啶等体积的二氯甲烷，在常温充氩气环境中搅拌过夜；(2)将步骤(1)的产物真空蒸发干燥得到固体残渣溶于二氯甲烷，溶液过凝胶柱分离纯化，得到二氧化硅化环孢霉素A；(3)制备一级粗产品：按质量体积比5g∶1ml将TMS‑CsA溶入乙醚中，再按TMS‑CsA与甲苯的质量体积比为1g∶30ml加入甲苯和按TMS‑CsA与氢化钠质量比2∶1加入氢化钠，在通氩气的条件下常温搅拌30min后冷却到4℃，按TMS‑CsA与环氧乙烷的质量体积比为1g∶6ml用注射器加入环氧乙烷，然后将反应器加盖封口，常温搅拌反应24小时后，加入2～3倍反应物体积的水，用1M的HCL酸化，加入4～6倍反应物体积的二氯甲烷混合，分离有机相后，加水洗提，洗提产物用硫酸镁干燥并过凝胶柱分离纯化得到一级粗产品；(4)于常温、通氩气的条件下，将一级粗产品2份和1，4丁二醇二缩水甘油醚按质量1份溶于甲苯中，一级粗产品与甲苯的质量体积比为1g∶5～10ml，常温搅拌2h后，按一级粗产品与乙酸乙酯质量体积比为1g∶100～200ml加入乙酸乙酯，及与乙酸乙酯等体积的水，分离混合液中有机相，用50％的氯化钠溶液洗提有机相，洗提产物用硫酸镁干燥并过凝胶柱分离纯化得到二级粗产品；(5)在搅拌状态下，取按二级粗产品与甲醇的质量体积比为1g∶40ml将二级粗产品加入甲醇中，补充水直至混合液有明显雾团，加入与二级粗产品质量比为1∶0.5～1.5的无水碳酸钾，常温通氩气搅拌过夜，用1M盐酸酸化处理，加入与甲醇等体积的水，用二氯甲烷提取有机相，用与甲醇等体积的盐水洗涤有机相后用硫酸镁干燥得到环孢霉素A半抗原。