采用植物组织培养葡萄风信子的方法

摘要

本发明涉及一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，包括以下步骤：(1)制备培养基：培养基A：MS+2，4-D+6-BA、培养基B：MS+NAA+6-BA、培养基C：MS+IBA+6-BA、培养基D：MS+IAA、培养基E：MS+IBA；(2)外植体消毒；(3)外植体接种在培养基A上进行诱导培养得到愈伤组织；(4)增殖培养：将愈伤组织转接到培养基B上培养；(5)不定芽分化：将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基C上，得到分化的不定芽；(6)生根培养：将不定芽转入培养基D上培养，得到组培苗；(7)继代培养：将生根的组培苗转接到培养基E上；(8)炼苗，将组培苗移栽至营养杯中，再转栽到大棚中。本发明解决了葡萄风信子繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化、鳞茎萎缩，不利于其品质延续和开发的问题。

主权项

一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备培养基：选择MS培养基作为基本培养基，2，4‑D、IAA、NAA、6‑BA和IBA作为调控的生长激素分别制备五种培养基：培养基A：MS+2，4‑D 0.5～1.0mg/L+6‑BA 1.0～2.0mg/L，培养基B：MS+NAA 0.5～1.0mg/L+6‑BA 1.0～2.0mg/L，培养基C：MS+IBA 0.5～1.0mg/L+6‑BA 1.0～2.0mg/L，培养基D：MS+IAA 0.2～1.0mg/L，培养基E：MS+IBA 0.5～1.0mg/L；培养基A、B、C和D中均附加25～30g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂，培养基E中附加25～30g/L的蔗糖和1～2g/L的琼脂，用1～2mol/L的NaOH溶液和HCL溶液调pH至5.8～6.0，并将培养基A、B、C、D和E在高压蒸汽灭菌锅中在121～125℃下灭菌15～20min，高压蒸汽灭菌锅中的压力为0.1～0.15MPa；(2)外植体消毒：选用葡萄风信子鳞茎作为外植体，用自来水冲洗1～2h后，在无菌操作台上用浓度为1％～2％的84消毒液消毒0.5～2min，用无菌水冲洗2～3次，再用浓度为0.1％～0.2％的升汞消毒8～12min，最后用无菌水冲洗4～5次，备用；(3)外植体诱导培养：将消毒后的外植体切成1～1.5cm2的片状外植体后，接种在培养基A上，接种瓶内每瓶平放3～5片的片状外植体，在培养室内进行诱导培养；20～30天后，在片状外植体的切口处产生淡黄色愈伤组织；(4)增殖培养：将诱导培养出的愈伤组织转接到培养基B上培养30～40d，使愈伤组织稳定的繁殖下去，保持进一步分化的能力；(5)不定芽分化：将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基C上，30～40d后可得到分化的不定芽；(6)生根培养：将不定芽转入培养基D上继续培养，培养30～40d得到株高为2～3cm的组培苗；(7)继代培养：将生根的组培苗转接到培养基E上，培养7～10d后，组培苗的根须达到4～5cm；(8)移栽：把接种瓶瓶口打开在培养室内散射光下炼苗5～7d，光照周期为24h·d‑1或16h·d‑1，光照强度为2000～2400Lux，培养室温度为25±2℃；取出接种瓶内的组培苗，用自来水洗净，再用蒸馏水稀释成500～600倍的多菌灵浸泡组培苗的根部20～30min，移栽至以蛭石、珍珠岩和营养土为混合基质的营养杯中；将营养杯放到人工气候箱中，光周期为16h·d‑1，光照强度为2000～2400Lux，白天23～25℃，晚上18～20℃，保持湿度在40％～60％；移栽后用1/12～1/10MS培养基母液浇灌，罩上塑料杯保湿，10～15d后去掉塑料杯，隔两周浇一次1/12～1/10MS培养基母液，30～40d后转栽到大棚中，成活率达95％～97％。