基于Cd-VIA族纳米颗粒检测淀粉酶活性的方法

摘要

本发明属于生物检测领域，提供了一种将Cd-VIA族纳米颗粒应用于淀粉酶活性的检测方法。第一步，合成淀粉稳定的Cd-VIA族纳米颗粒；第二步，离心纳米颗粒，向沉积物中加入去离子水，超声波分散获得产品；第三步，将已知不同活性的淀粉酶样品、磷酸缓冲液和去离子水混合，向其中加入第二步产品后立即开始计时，记录混合液中出现浑浊时一一对应的时间。以酶活性倒数为横坐标、该时间为纵坐标作图，采用线性拟合获得校准关系式；第四步，对活性未知的淀粉酶样品按第三步操作，记录出现浑浊时所需时间。将此时间代入第三步校准关系式，计算出未知的酶活。上述淀粉酶样品包括标准酶试剂、唾液样品。该酶活检测方法简单实用，具有快速、成本低廉等特点。

主权项

一种基于Cd‑VIA族纳米颗粒检测淀粉酶活性的方法，其特征在于包括如下步骤：第一步，取浓度为0.5～2.0mg/mL、温度为25℃的淀粉溶液，向50mL淀粉溶液中加入0.04～0.2mmol Cd盐和0.02～0.1mmol VIA族元素的钠盐，随后在60～90℃下加热1～3小时，合成淀粉稳定的Cd‑VIA族纳米颗粒；第二步，以12000转/分钟的速度离心第一步所得样品，弃去上清液，向沉积物中按沉积物∶水的重量比为1∶600加入去离子水，超声波重新分散获得棕红色胶体溶液产品；第三步，将2μL不同活性的商品化标准淀粉酶样品、25μL 0.2mol/L pH5.5～8.0磷酸缓冲液和35μL去离子水加入0.5mL规格的透明塑料离心管中，得预备混合溶液，向该预备溶液加入38μL第二步所得产品后立即开始计时，观察并记录与不同活性的商品化标准淀粉酶样品一一对应的混合液中开始出现浑浊时所需消耗的时间。以酶活性的倒数为横坐标、消耗时间为纵坐标，根据上述数据作图，并采用线性拟合获得校准关系式：t＝25.23+166.95/Activity，t为所需消耗的时间，单位：秒；Activity为酶活性，单位：活性单位/mL；第四步，将2μL活性未知的淀粉酶样品、25μL 0.2mol/L pH5.5～8.0磷酸缓冲液和35μL去离子水混合加入0.5mL规格的透明塑料离心管中，得预备混合溶液，向该预备溶液加入38μL第二步所得产品后立即开始计时，观察并记录混合液中出现浑浊时所需消耗的时间，将此时间代入第三步所得校准关系式，计算出未知的酶活性。