噬菌体芯片作为蛋白类芯片或基因芯片的应用

摘要

本发明公开了一种噬菌体芯片作为蛋白类芯片或基因芯片的应用。本发明分别通过筛选噬菌体肽库或构建噬菌体展示库，获得展示特异性外源肽(或抗原表位)的噬菌体克隆，利用自动或非自动方式，按照预先设计的阵列模式将展示不同外源肽的噬菌体直接偶联于同一芯片片基上，获得噬菌体芯片。该芯片既可作为展示外源肽的蛋白类芯片，用于人体和实验动物各种样本中抗体、配体及天然或人工合成物中特异性结合物的检测、筛选和鉴定，也可作为克隆相关基因的基因芯片，用于相关基因的检测。该噬菌体芯片具有成本低廉、制备简单、稳定性高、特异性高、易于长期保存等显著特点。

主权项

噬菌体芯片作为蛋白类芯片用于人体或实验动物各种样本中抗体、配体和天然或人工合成物中特异性结合物的检测、鉴定和筛选的应用，或作为基因芯片用于特异性基因检测的应用；用于噬菌体芯片的制备通过以下途径获得：采用特异性抗体或配体通过常规的吸咐、洗脱、扩增的方法，筛选噬菌体随机肽库，挑取单克隆噬菌体，并经扩增、DNA的提取、测序和同源性分析，确定展示特异性外源肽或抗原表位的噬菌体克隆；采用芯片点样仪将上述经过鉴定的展示特异性外源肽的噬菌体的溶液1μl按照预先设计的阵列模式偶联至NC膜上，并设阴性对照；在进行抗体或配体检测时：分离样本中的抗体，采用Cy3荧光标记法进行抗体的标记，5％脱脂奶室温封闭噬菌体芯片，加入Cy3标记的待检测样，室温孵育2h，TBST洗，10min×3，荧光扫描仪判读结果；在进行配体筛选时：封闭制备好的噬菌体芯片，加入稀释的含有被检测配体的人体或实验动物体血清、体液、组织提取液及天然或人工合成物中特异性配体或结合物，4℃过夜或室温孵育或37℃孵育，PBS缓冲液冲洗，采用表面增强激光解吸/离子化‑飞行时间质谱技术，进行配体筛选。