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罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)无菌材料的获得在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，除去外面包裹的茎片，用自来水冲洗1‑3h，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为70‑75％的乙醇浸泡10‑50s，体积浓度为0.5‑2‰的汞浸泡10‑30min，再用无菌水冲洗4‑6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0.5‑2cm的带腋芽的节段，节段接种于小球茎诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于小球茎诱导培养基上1‑3周后，其基部开始膨大，出现黄绿色突起，3‑4周后节段上看见芽分生组织，再培养1‑2个月，有0.1‑0.3cm大小的小球茎长出，将小球茎切下移入球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；(3)小球茎壮苗培养在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎呈丛状分布，每丛有4‑6个球，将小球茎再分成小丛，每丛有1‑3个芽，然后将分成小丛的小球茎转至壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，20‑30天后长到0.3‑0.5cm；(4)生根培养取0.3‑0.5cm的小球茎，转接入生根培养基中诱导生根，8‑15天后小球茎幼苗的基部分化出白色的根原基，25‑35天后长至2‑4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90‑100％；(5)炼苗与移栽在生根培养30‑35天，根系长至2‑3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗1‑3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化25‑40天，即移栽室外，并给予肥水管理；所述的小球茎诱导培养基包括MS+6‑BA0.1‑5.0mg/L+NAA0.1‑0.5mg/L；所述的球茎增殖培养基包括MS+6‑BA3.0mg/L；所述的壮苗培养基包括MS+6‑BA1.0‑3.0mg/L； 所述的生根培养基包括MS+NAA0.05‑0.2mg/L。 |
