不含基因组DNA的总RNA制备方法

摘要

本发明公开了不含基因组DNA的总RNA制备方法，采用十二烷基硫酸钠作为裂解试剂，裂解细胞后使用醋酸钾和十二烷基硫酸钠反应生成十二烷基硫酸钾(PDS)沉淀，同时共沉淀蛋白质以及大部分基因组DNA。然后利用在硫氰酸胍存在时核酸可被酚抽提液吸附，并且吸附的核酸可按分子量大小利用一定浓度醋酸钾解离的性质，在核酸中加入一定浓度的硫氰酸胍和酸性醋酸钾，采用酚抽提分离总RNA和残留的基因组DNA。最后采用乙醇沉淀得到总RNA样品。本法利与现有技术相比，所得RNA样品残留基因组DNA最少，每微克103拷贝(约4皮克)。

主权项

不含基因组DNA的总RNA制备方法，包括以下步骤：a)使用重悬液重悬需要提取的生物材料；b)加入与重悬液体积相同的十二烷基硫酸钠溶液，室温裂解3‑5分钟，或65度裂解0.5‑1分钟；c)加入酸性醋酸钾溶液，离心，去除出现的沉淀，取上清，醋酸钾和十二烷基硫酸钠溶液摩尔比值为1∶0.9‑1.1；d)将c)步骤所得上清加入酸性醋酸钾溶液，硫氰酸胍贮液，使醋酸钾终浓度为750mmol/L，硫氰酸胍为1.5mol/L；加入与上清、酸性醋酸钾溶液，硫氰酸胍贮液的总体积相等的酚抽提液，振荡混匀，离心，吸取水相，在水相中加入无水乙醇，混匀后，‑20度静置10分钟，离心，弃上清；e)将所得RNA沉淀用洗涤液洗涤两次，空气中晾干，然后加入超纯水溶解，即可。