胶原蛋白人造产品、胶原蛋白溶液制备方法及从动物组织中分离胶原蛋白的方法

摘要

本发明公开了不同动物组织中分离胶原蛋白的方法，制备胶原蛋白溶液的方法及胶原蛋白的人造产品。为了这个目的，本发明提供了一种从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法，包括胶原蛋白的最终处理：在中性、低温条件下处理就有预定浓度的胶原蛋白溶液，然后在30至35℃过夜处理；离心收集胶原蛋白；将收集到的胶原蛋白溶解于弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液(PBS)，从而制备浓度为1至5mg/mL的胶原蛋白溶液。本发明由上述组成，可以实现从动物骨和软骨组织、皮肤组织和腱/韧带组织有效分离胶原蛋白的方法，从上述分离组织制备胶原蛋白溶液的方法，利用上述胶原蛋白制备基质和高度浓缩胶原蛋白溶液。

主权项

一种从动物组织中分离胶原蛋白的方法，从而获得重量为原始组织重量5‑10％的胶原蛋白，包括：1)分离的猪骨组织经蒸馏水、乙醇和丙酮充分洗涤；2)骨组织切成圆环形状，‑20℃保存；3)为了从骨组织中分离胶原蛋白，骨组织制成粒径1‑500μm的粉末；4)用乙醇和蒸馏水洗涤骨组织粉末；5)洗涤过的骨粉末用0.5N HCl过夜处理，10‑100rpm振荡；6)骨粉末用胃蛋白酶处理，组织和胃蛋白酶的比例是10‑50∶1，胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中；7)胃蛋白酶反复处理2至5次，共计3至7天；8)蛋白酶处理过的骨粉末溶液，4℃，12,000g离心30分钟，分离并保存上清，沉淀重复步骤7)；9)用终浓度为0.5至0.8M的NaCl溶液处理上述分离并保存的上清，4℃，4小时至1天；10)12,000g，4℃离心30分钟，弃沉淀，收集上清；11)上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M；12)上述溶液4℃处理4小时至1天，离心，弃沉淀，收集上清；13)向收集到的上清中加入NaCl，至NaCl终浓度为2.6M，4℃静置4小时至1天；14)离心，弃上清，所得沉淀用95％乙醇洗涤一至两次，蒸馏水重悬；15)在重悬溶液中加入1N HCl，每100mL悬浮液加1mL 1N HCl，4℃中性条件下滴定；16)上述滴定溶液30‑37℃静置4小时至1天，离心；17)沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬，浓度为1‑30mg/mL，4℃保藏。