分离纯化苏云金芽孢杆菌中的水溶性抗生素-Zwittermicin A的方法

摘要

本发明公开了一种等电聚焦电泳法分离纯化苏云金芽孢杆菌中的水溶性抗生素-Zwittermicin A的方法。用无水乙醇和石油醚初步纯化苏云金芽孢杆菌发酵液的上清液，制样，将上清液样品、两性电解质液体、溴酚蓝、蒸馏水及琼脂糖配成胶液，将其升温至75～85℃溶解充分，保温将其灌到直径约为0.3cm的医用胶管中，冷却两小时后接入电泳池，阴阳两极分别按要求加入电解液，胶管的两端均需浸入电极液中，进行等电聚集电泳，既可分离纯化出的水溶性抗生素-ZwittermicinA。本发明实验试剂及样品与空气隔绝，避免氧化，结果更为精准，并且操作简单，能够将抗生素-Zwittermicin A有效分离出。

主权项

一种分离纯化苏云金芽孢杆菌中的水溶性抗生素‑Zwittermicin A的方法，其特征在于具体步骤为：将苏云金芽孢杆菌即Bacillus thuringiensis subsp的发酵液经10000r/min离心10min，得发酵液上清液，在50℃将上清液水相真空浓缩至50倍；根据体积比，在浓缩液中加入1/2体积的无水乙醇，然后经10000r/min离心10min，丢弃沉淀相，保留水相；水相中加入等体积的石油醚，摇匀，静置，分离水相和石油醚相，丢弃石油醚相，保留水相；既得经无水乙醇和石油醚初步纯化的上清液样品，收集备用；将pH为3.5～9.5的载体电解质液体1.5‑2.5mL、上清液样品0.5‑1.5mL、溴酚蓝一滴、蒸馏水6‑8mL、琼脂糖0.05‑1.5g混合，将混合胶液升温至75～85℃溶解充分，保温将胶液灌到粗细均匀，直径约为0.3cm的医用胶管中，冷却两小时后接入电泳池，阳极加入60～80mL0.5mol/L醋酸溶液，阴极加入60～80mL0.5mol/L氢氧化钠溶液，胶管的两端均需浸入电极液中，使用JY5000电泳仪，调整电流，使功率输出保持在1～2W，当管中的溴酚蓝颜色集中成一点时，停止电泳，将胶管以溴酚蓝点为中心，分别切为1cm的小段，然后经抑菌试验分析可知，靠近溴酚蓝的那段管中就是用电泳法分离纯化出的水溶性抗生素‑Zwittermicin A；所述试剂均为分析纯。