一种利用基因的协同作用培育抗黄萎病棉花的方法及其应用

摘要

本发明提供一种利用基因的协同作用培育抗黄萎病棉花的方法及其应用。利用转基因技术，分别将抗黄萎病的几丁酶基因Bbchit1和抗菌蛋白基因LjAMP2转入棉花，然后通过有性杂交将两个不同来源的抗病基因整合到同一植株，实现不同抗病基因在同一植株内同时组成型表达，利用两个基因的协同作用有效提高棉花对黄萎病的抗病能力。结果表明，利用该方法获得的转基因棉花人工气候室接种落叶型黄萎病菌后，病情指数为10-25，可较野生型对照降低75％以上。该方法简便易行，效果显著，能为棉花抗黄萎病育种，特别是抗落叶型黄萎病育种提供新的抗源，为棉花生产带来巨大的经济效益，具有很好的市场前景。

主权项

一种利用基因的协同作用培育抗黄萎病棉花的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)获得球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2，并分别构建Bbchit1和LjAMP2基因组成型表达的植物表达载体P5‑35S‑Bbchit1和P5‑LjAMP2；其中，所述Bbchit1基因序列如序列1所示，所述LjAMP2基因序列如序列2所示，P5‑35S‑Bbchit1、P5‑LjAMP2和P5的构建分别如图1、图2和图3所示；(2)利用根癌农杆菌介导法将Bbchit1和LjAMP2基因组成型表达的植物表达载体P5‑35S‑Bbchit1和P5‑LjAMP2分别转入棉花，实现Bbchit1和LjAMP2基因在棉花内的组成型表达；(3)将步骤(2)获得的转基因棉花进行抗病鉴定和选育，筛选黄萎病病情指数60‑80，植株生长发育正常的纯合株系；(4)分别以步骤(3)获得的球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2转基因棉花纯合株系为父本和母本进行有性杂交，获得杂交F1代，实现球孢白僵菌几丁酶基因Bbchit1和益母草抗菌蛋白基因LjAMP2在同一植株内同时进行组成型表达，利用二者的协同作用提高棉花对黄萎病的抗病能力。