抑制素重组融合蛋白在制备促进母猪发情和配种药物方面的应用

摘要

本发明公开了一种抑制素重组融合蛋白在制备促进母猪发情和配种药物方面的应用。所述抑制素对成年母猪的免疫中，首次免疫使用0.5mg～1mg抑制素重组蛋白；在首次免疫后15～21天后可以进行第二次免疫，使用0.25mg～0.5mg抑制素重组蛋白。免疫抑制素能使母猪的发情率升高，产仔数增加。本发明对克服母猪夏季热应激导致的乏情、促进种猪繁殖活动，特别是促进种母猪和后备母猪发情和提高产仔数具有显著的效果，从而减少种母猪的非生产时间，能提高种母猪的繁殖性能，提高母猪饲养的经济效益。

主权项

一种抑制素重组融合蛋白的应用，其特征在于应用于制备促进母猪发情、成功配种和正常受胎疫苗或抑制素基因工程调控抗原或药物方面；所述抑制素重组融合蛋白的制备方法包括以下步骤：  （a）根据现有的抑制素基因序列，设计特异性上游引物I1和下游引物I2；所述上游引物I1和下游引物I2核苷酸序列为：I1：5’‑ATGTGGCCTCAGCTGCTCCTCTTGC‑3’；I2：5’‑TTAGATGCAGGCACAGTGCTGGGTG‑3’；  （b）采取异硫氰酸胍‑氯仿‑异丙醇方法从蓝塘猪卵巢组织中提取总基因组RNA，通过反转录得到cDNA；  （c）用引物I1、I2、dNTP和反转录合成cDNA作为模板，在DNA聚合酶的催化下通过PCR反应扩增猪抑制素的编码cDNA片段；（d）根据抑制素成熟肽的cDNA碱基序列和大肠杆菌表达质粒pRSET A的多克隆位点碱基序列，设计合成上游引物Mf和下游引物Mr；所述上游引物Mf和下游引物Mr核苷酸序列为：Mf：5’‑AATAGATCTTCTCCACCGCCCCTCTGCCC‑3’；Mr：5’‑ATCGAATTCAGATGCAGGCACAGTGCTGGG‑3’；（e）利用所述引物Mf、Mr以及上述反转录扩增得到的抑制素的编码cDNA序列为模板，通过PCR反应扩增出抑制素成熟肽的cDNA克隆片段；（f）所述抑制素成熟肽的cDNA克隆片段经过Bgl II和EcoR I双酶切后，克隆到表达质粒pRSET A的Bgl II和EcoR I两酶切位点之间，构建成重组表达质粒pInhibin SCAU；（g）将所述重组表达质粒pInhibin SCAU 转化到大肠杆菌株，在培养液中加入0.05mmol/L～0.2 mmol/L的IPTG诱导，得到重组细菌表达的抑制素重组融合蛋白。