灵敏检测多种样品中三聚氰胺的毛细管电泳在线富集方法

摘要

本发明属于分析检测技术领域，公开了一种灵敏检测多种样品中三聚氰胺的毛细管电泳方法。该方法通过两种在线富集技术(阳离子耗尽进样和胶束扫集)联用测定三聚氰胺，使三聚氰胺的富集灵敏度与普通的区带毛细管电泳相比提高了2600倍，检出限降低为1.8μg/kg。本发明采用低电渗流下的电动进样，对进入毛细管中的样品有选择性，受样品基质影响小，不需要如液相色谱等方法中复杂的样品预处理过程，适用于多种样品中三聚氰胺的检测；灵敏度高，比已有的液相色谱、荧光光谱法的检出限降低两到三个数量级；所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，污染小，环境友好；所需溶剂和样品用量小，使用的空心毛细管柱价格便宜，分析成本低。

主权项

一种具有高灵敏度的毛细管电泳在线富集方法测定多种样品中的三聚氰胺的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将三聚氰胺标准品溶解在20％甲醇水溶液中，配制成浓度为2.000g/L的储备液。避光4℃保存。使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。在普通的区带毛细管电泳(CZE)和阳离子耗尽进样联用胶束扫集(CSEI‑sweep MEKC)的模式下，在最佳检测条件下，对三聚氰胺的标准品进行毛细管电泳分析。得到标准谱图。(2)采用CZE和CSEI‑sweep MEKC方法在最佳检测条件下，对样品的提取液进行分析，获得样品的毛细管电泳图。(3)根据三聚氰胺的校正曲线方程，计算出步骤(2)中不同样品中三聚氰胺的含量。所述最佳检测条件为：CZE电泳条件：压力进样3kPa，进样时间15s，运行缓冲液：20mmol/L磷酸二氢钠(pH 2.2)‑10％(体积分数)甲醇，三聚氰胺溶液(8mg/L)配制在运行缓冲液中。CSEI‑sweep MEKC方法：首先在毛细管内充满非胶束背景缓冲液(NBGE)，然后在毛细管中加压注入一段水柱(30s，P＝3kPa)，样品采用电动进样(60s，20kV)，水柱提供的高电场使样品快速向出口端迁移，同时在电渗流的作用下水柱向进口端迁移，由进口排出。样品离子迁移到水和低pH背景电解质的界面，背景电解质的低电场降低了样品的迁移速度，形成一段样品区带。进样完毕后进出口端均换上低pH胶束背景电解质，在负压(‑18kV)下，运用胶束扫集样品区带，使样品区带更窄。非胶束背景电解质缓冲溶液(NBGE)的组成为：20mmol/L NaH2PO4(pH 2.2)、10％甲醇(v/v)。样品基质为：0.1mmol/LNaH2PO4(pH 2.2)‑20％乙腈。三聚氰胺溶液(0.6mg/L)配制在样品基质中。根据权利要求1所述的一种具有高灵敏度的毛细管电泳在线富集方法测定多种样品中的三聚氰胺的方法，其特征在于：步骤(2)中配方奶粉、牛奶和动物饲料中三聚氰胺的样品预处理过程按照以下步骤进行：分别称取2.000g动物蛋白饲料、配方奶粉或牛奶3mL乙腈，超声10min，以7000r/min离心6min，吸出上清液，在下层沉渣中再加3mL乙腈，操作方法同上，反复提取三次，合并上清液，并将其放入冰箱内冷冻5min，取出后用普通滤纸过滤，然后用0.45μm过滤膜过滤得样品溶液。所有溶液进入毛细管前均经过0.45μm过滤膜过滤，经超声脱气后使用。根据权利要求1所述的一种具有高灵敏度的毛细管电泳在线富集方法测定多种样品中的三聚氰胺的方法，其特征在于：对毛细管进行如下处理：毛细管在使用时，分别用0.1mol/L HCl、超纯水、0.1mol/LNaOH、超纯水、非胶束背景缓冲液冲洗10min。两次MEKC样品分析运行期间，分别用0.1mol/LNaOH、超纯水、非胶束背景缓冲液冲洗5min，以获得良好的分离检测重现性。根据权利要求1所述的一种具有高灵敏度的毛细管电泳在线富集方法测定多种样品中的三聚氰胺的方法，其特征在于：在最佳的富集检测条件下，三聚氰胺的富集倍数比普通区带毛细管电泳法提高了2600倍。方法的线性范围为2‑1000μg/L，检出限为0.77μg/kg(S/N＝3)，迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别小于5.2％和3.5％。