| 发明名称 | 丝孢酵母(Trichosporon sp )21148三磷酸甘油酯激酶启动子序列及其克隆方法 | ||
| 摘要 | 本发明涉及一种基因序列及其克隆方法。丝孢酵母Trichosporon sp 21148三磷酸甘油酯激酶基因启动子序列的克隆，其特征在于：选择18种不同来源的三磷酸甘油酯激酶，将其氨基酸序列利用生物信息学软件进行分析比对，选取两个比较保守的结构域RVDFNVP和NADAFGT，利用密码子表反推出其对应的简并引物，得到简并度大大降低的目标引物BPGK1和BPGK2；以丝孢酵母Trichosporon sp 21148基因组DNA为模板，用简并引物扩增到了丝孢酵母Trichosporon sp 21148三磷酸甘油酯激酶基因的部分DNA序列，在此基础上通过染色体步移的方法获得了它的上游启动子序列。本发明克隆了丝孢酵母的强启动子，为进行丝孢酵母的载体构建及转基因工程操作提供启动元件。 | ||
| 申请公布号 | CN101942434A | 申请公布日期 | 2011.01.12 |
| 申请号 | CN200910063346.5 | 申请日期 | 2009.07.28 |
| 申请人 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 发明人 | 江木兰;王萍;万霞;张银波 |
| 分类号 | C12N15/11(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N | 主分类号 | C12N15/11(2006.01)I |
| 代理机构 | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人 | 黄行军 |
| 主权项 | 1.丝孢酵母(Trichosporon sp)21148三磷酸甘油酯激酶启动子序列，其特征在于它的序列如下：ATACGACTC<u>ACT</u><img file="F2009100633465C00011.GIF" wi="632" he="49" />ACGGCCCGGGCTGGTCT<img file="F2009100633465C00012.GIF" wi="143" he="68" />ACTCTGGCTTCTC<img file="F2009100633465C00013.GIF" wi="343" he="69" />TATAATGTATTTTTTGCTTTAGAATTTGAAAGGGTTCAAATAAAGTTGGTGTCAAATATTTAGTGCAGA<img file="F2009100633465C00014.GIF" wi="145" he="67" />TCAAATTTATATGGTTTCTAGGAAAGACTAGACTATTACCTCAAAGGTCCTATCCTAGATTGACACCCTAGA<img file="F2009100633465C00015.GIF" wi="173" he="68" />ACTAGTCTCCTCTGAAAACGGTCTAGCAAAA<img file="F2009100633465C00016.GIF" wi="178" he="67" />TCGCGAACAAGATTTTTAATTGCACCATGAGACGATCA<img file="F2009100633465C00017.GIF" wi="47" he="67" /><img file="F2009100633465C00018.GIF" wi="118" he="67" />TGAAAAATTGTATGATCTGAAGCACAAGGTACACTTTGATGGTTAAATGAGCTGGAATTGTTAGGTGATTGGGTATGTACAACGTGTCTGAGGCT<img file="F2009100633465C00019.GIF" wi="161" he="68" />ACATTCTATCCCAGTCGTAGTCAGCCTGGTGCTCTTAATTCCTTGTACTACACTCTGAGCTGTACTTCTCTGATTGTA<img file="F2009100633465C000110.GIF" wi="142" he="67" />AATGCTCGTGGTGAGCCTTTCTATC<img file="F2009100633465C000111.GIF" wi="156" he="67" />ATGAGCTAGCATTGACACATAATAAATCA<img file="F2009100633465C000112.GIF" wi="173" he="67" />TCACTC<img file="F2009100633465C000113.GIF" wi="172" he="68" />TTAAA<img file="F2009100633465C000114.GIF" wi="178" he="67" />CCAGA<img file="F2009100633465C000115.GIF" wi="174" he="67" />TCCTTCTGTAGTCTTCCATAATCTTCCATAATCCTCTATAATCCACTCTATTACTCTAATTATCACTCCCAGTTTACCCTTCTTACAAAATTTGCATCCCACCGTTGACTCGTCCGTTGATGTCGTTGACGTTCGTGG<img file="F2009100633465C000116.GIF" wi="180" he="68" /><img file="F2009100633465C000117.GIF" wi="46" he="67" />GCCCGGCACACACGCTCACACGGTGCAACATCAC<img file="F2009100633465C000118.GIF" wi="179" he="69" />GCTACTCCCTCGAGCTGGTGATGGAACAAGCCCAGTGG<img file="F2009100633465C000119.GIF" wi="299" he="72" />GGAGTGCTATCCCCCTGTTGCTT<img file="F2009100633465C000120.GIF" wi="55" he="74" />CAACCTTCTTTACTACCACATCAACAATACTT<img file="F2009100633465C000121.GIF" wi="157" he="68" />TATTAAACAAAGTAAGCACAGTGAACACTCAATTGACATCTCAATAGCT<img file="F2009100633465C000122.GIF" wi="865" he="41" /><img file="F2009100633465C000123.GIF" wi="102" he="50" />TCTTTATCAAGCAAATTATCAGTCACTGACTTGAACGTTGAAAACAAACGTGTCTTTATCCGTGTTGATTTCAACGTCCCATTAGATGGTACTAAAATCACAAACAATCAAAGAATTGTTGCTGCTTTACCAACCATCCAATACGTTGCTGAACATAAACCAAAAGCTATCATCTTGGCTTCTCATTTAGGTAGACCAAATGGTGAAAGAAATGAAAAATATTCTTTAAAACCTGTTGTTGCTGAATTATCTTCATTATTAGGTAAACAAGTTACTTTCTTAAACGATTGTGTTGGTG<u>ATGAAGTTGAAAAAGCCGTTAATGGTGCCA</u>其中：<img file="F2009100633465C000124.GIF" wi="109" he="74" />是启动子中的TATA box，CAAT box；<img file="F2009100633465C000125.GIF" wi="115" he="74" />是AGAG-box和TGTG启动子中的顺式作用元件；<img file="F2009100633465C000126.GIF" wi="50" he="75" />代表可能的转录起始位点；<img file="F2009100633465C000127.GIF" wi="121" he="50" />指的是起始密码子；粗斜体部分代表启动子扩增所需引物148PP1，148PP2部分；“_”指染色体步移所需引物AP2和GSP2部分；斜体部分指的是染色体步移所得片段测序结果与简并引物扩增所得序列测序结果一致的序列。 | ||
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