一种以拟南芥寡核苷酸片段为探针检测铀污染的方法

摘要

本发明公开了一种以拟南芥特异寡核苷酸片段为探针来检测羽叶鬼针草铀污染的方法，从铀尾矿区和非污染对照区的羽叶鬼针草提取的总RNA与29KArabidopsis Genome Array芯片杂交，确定特异表达的上调基因，作为铀污染检测的探针；从待检测环境及非污染对照区中的羽叶鬼针草提取的总RNA与29KArabidopsis Genome Array芯片杂交，检测是否有特异表达的拟南芥同源上调基因，从而得知待检测环境中羽叶鬼针草是否遭到铀污染，这种检测方法可以远离污染环境进行安全检测，并且其灵敏度高且特异性专一，只针对铀的污染，解决了污染区周边环境铀污染难以准确检测的问题，可以准确确定污染源及是否环境被污染。

主权项

一种以拟南芥特异寡核苷酸片段为探针来检测羽叶鬼针草铀污染的方法，其步骤包括：(1)采集待检测环境及非污染对照区中的羽叶鬼针草，将整株羽叶鬼针草放置于 196℃液氮冷藏待用；(2)将冰箱保存的羽叶鬼针草放置研钵中加液氮研磨，采用异硫氰酸胍法提取总RNA；(3)对样品RNA进行荧光标记：(a)反转录合成1 strand cDNA；(b)合成2 strand cDNA；(c)体外转录合成cDNA；(d)随机引物反转录；(e)cDNA用KLENOW酶标记；(4)杂交与清洗；(5)芯片扫描；(6)芯片图像的采集与数据分析；(7)对29K Arabidopsis Genome Array芯片杂交信号进行分析；(8)寻找羽叶鬼针草铀诱导下特异表达的拟南芥同源上调基因；(9)作出结论：待检测环境中羽叶鬼针草是否遭到铀污染。