一种抗流行性感冒特异性复合IgY及其制剂

摘要

本发明公开了一种抗流感病毒各个多肽抗原以及抗继发感染细菌的特异性复合IgY及其制备方法；本发明同时还提供了一种天然、安全又具有特效作用的、预防和治疗流行性感冒的抗流感病毒特异性IgY和/或抗继发感染特异性IgY口喷剂、鼻喷剂、滴鼻剂、滴眼剂以及各种注射剂。这些特异性的IgY完全可以从根本上预防和治疗由易变异的流感病毒所引起的流行性感冒，因此，可以克服“流感疫苗”固有的、对变异了的流感病毒没有作用的弱点，比“流感疫苗”更方便、更经济、更安全、更有效。

主权项

一种制备抗流感病毒的特异性IgY的方法，其特征在于该特异性IgY是经以下方法制备而成：选定A型流感病毒H3N2株、H1N1株及H2N2株和B型流感病毒B-Vactoria株；将上述四种病毒株分别采用常规鸡胚尿囊法，在鸡胚尿囊中培养；收取含有病毒的尿囊液，然后以鸡红细胞法粗提；再用蔗糖密度梯度超速离心法或凝胶柱层析法纯化病毒，即分别得到提纯的H3N2、H1N1、H2N2和B-Vactoria 4种流感病毒悬浮液；分别取提纯的H3N2、H1N1、H2N2和B-Vactoria四种流感病毒悬浮液，分别加入20％十二烷基硫酸钠，最终浓度为2.0％，于37℃裂解30分钟，即分别得到上述4种流感病毒裂解液；将这4种流感病毒裂解液按1.0∶0.5∶0.5∶1.0的比例混合均匀，制成混合裂解液，再按1∶1的比例在混合裂解液中加入福氏佐剂，置入高速匀浆器中，以8,000rpm高速匀化，形成油包水液体，即制成含多种流感病毒裂解成份的病毒复合抗原；以这种复合抗原免疫健康的产蛋母鸡，每隔二周再强化注射一次，共计免疫三次；第一次注射后第20天开始检取免疫蛋，将其用流动水冲净，75％乙醇消毒，晾干破碎蛋壳，以蛋黄筛滤去蛋清，留取蛋黄加5倍蒸馏水搅匀，用1.0NHCL调pH至5.5-6.0，搅拌均匀，2-6℃静置过夜，于10,000rpm离心20分钟，取上清进行超滤浓缩10-20倍；继而加入2.0％海藻酸钠液，至终浓度为0.1％，搅拌至出现浑浊；再加入2.0％ CaCI2液，至终浓度为0.1％，搅拌均匀，4℃过夜10小时；8,000rpm离心20分钟，取上清；0.45μm膜串连0.22μm膜过滤除菌，Ultipor VFTMDV50除病毒过滤器除去病毒；冷冻干燥；即制得抗流感病毒特异性IgY粗提物；将以上IgY粗提物先后过离子交换树脂柱和凝胶层析柱层析，即制得抗流感病毒特异性IgY纯品。