纳米金结合聚噻吩衍生物比色检测目标靶DNA的方法

摘要

本发明涉及一种纳米金结合聚噻吩衍生物比色检测目标靶DNA的方法，包括：检测试剂(纳米金和聚噻吩衍生物)及探针的准备；目标靶序列的检测等。该发明基于聚噻吩衍生物与ssDNA/dDNA结合时使得DNA-纳米金溶液的稳定性发生变化而引起颜色改变产生信号级联放大的原理，通过颜色转变显示剂以及扩增标签的双重作用实现DNA的高灵敏快速检测，从而建立利用纳米金结合聚噻吩衍生物进行基因直接检测的分析平台。该方法操作简单，不需要特殊的仪器设备，具有特异、快速和高灵敏的特点，可望应用于临床检验医学及环境中靶目标DNA的诊断和检测。

主权项

一种纳米金结合聚噻吩衍生物比色检测目标靶DNA的方法，包括：(一)检测试剂及探针的准备(1)纳米金溶液的制备首先，配置浓度为1mM HAuCl4溶液及浓度为38.8mM的柠檬酸三钠溶液，并将HAuCl4溶液加热至130℃，在加热过程中搅拌充分，20分钟时迅速加入柠檬酸三钠溶液25ml，在加入过程中不使HAuCl4溶液降温，持续搅拌至溶液冷却至室温、形成酒红色溶液，最后用硝酸纤维尼龙膜过滤溶液，4℃保存备用。(2)H1N1DNA检测探针的设计及合成以流感病毒H1N1序列为靶目标基因模板，建立利用未修饰的纳米金复合聚噻吩衍生物进行基因直接检测的分析方法，DNA探针序列为：H1N1 DNA探针：5’-ACGGAAGGAGTGCCAA-3’；互补的靶H1N1 DNA：5’-TTGGCACTCCTTCCGT-3’；非互补DNA：5’-AGTAGTGTTGGGTCGC-3’；(3)聚噻吩衍生物的制备在检测DNA杂交中，选择阳离子共轭聚合物[3-(3’-N，N，N-triethylamino-1’-propyloxy)-4-methyl-2，5-thiophene hydrochloride]作颜色指示剂，选择性灵敏地检测单链或双链DNA；(二)目标靶序列的检测1.单链或双链DNA杂交溶液制备取去离子水4.5μL，加入5μL 0.2M NaCl/0.1M pH＝7.4的phosphate buffer、0.25μL 100μM H1N1 DNA探针或0.25μL 100μM非互补的寡核苷酸DNA，充分混匀，制备单链DNA溶液；或另取去离子水4μL，加入5μL的0.2MNaCl/0.1M pH＝7的phosphate buffer、0.5μL 100μM H1N1 DNA探针以及0.5μL100μM完全互补的靶H1N1 DNA，充分混匀，互补的的两个单链DNA经过杂交形成双链的DNA，制备为双链DNA溶液；2.基于纳米金结合聚噻吩用于互补靶DNA的检测取两管浓度为12nM纳米金溶液100μL，分别加入非互补的探针单链DNA溶液和序列完全互补双链DNA溶液各1μL，混匀，观察纳米金溶液的颜色；再分别加入浓度为0.05mg/ml 1μl聚噻吩，充分混匀，观察纳米金溶液的变化。