一种辣（甜）椒根腐型疫病的快速检测方法

摘要

本发明为“一种辣(甜)椒根腐型疫病的快速检测方法”，属于生物技术领域。本发明涉及的辣(甜)椒根腐型疫病的快速检测方法，其特征是该方法应用ELISA的改进新技术斑点ELISA(Dot-ELISA)技术，其试剂用量少；操作简便快速，不需要特殊设备条件，适合基层单位使用；抗原膜保存期长，20％可保存半年，不影响其活性；并可邮寄供现场流行病学调查使用；检测结果可长期保存，便于复查，适宜现场检测和该病害流行性发生的快速预测。本发明还涉及到检测程序、工作条件、可检测量，检测用到的药品、器具。

主权项

一种辣(甜)椒根腐型疫病的快速检测方法，其特征主要包括：常温条件下，利用间接Dot-ELISA方法，对辣(甜)椒根腐型疫病具体检测程序为：(1)分别以辣(甜)椒根腐型疫病菌菌丝体的可溶性蛋白抗原免疫家兔获得抗血清；(2)采用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE纤维素离子交换层析法对抗血清进行纯化；(3)对纯化抗体进行间接Dot-ELISA方法最佳工作条件筛选。(4)现场检测：取健康植株和待测植株组织，把待检测组织用眼科剪刀剪成小块，放入50mL离心管中；(5)向离心管中加1号试剂，以浸没组织块为宜；(6)用玻璃研磨器把待检测组织块研碎；(7)用取液针取待检测组织液，点于固相膜上；(8)待膜干后，反复用取液针进行点样5-7次，待最后一次膜干(9)将膜浸于2号试剂中1小时；(10)用3号试剂摇荡洗三次，每次5min；(11)将膜浸于疫霉病菌免疫抗血清中，室温放置2小时；(12)用3号试剂摇荡洗三次，每次5min；(13)将膜浸于4号试剂中，于室温放置2小时；(14)用3号试剂摇荡洗三次，每次5min；(15)将膜浸于6号试剂中，于室温避光反应10min；流水冲洗终止反应，目视法判断结果：凡显示黑紫色斑点的表明检测样品为疫霉病，无色或斑点颜色极浅者表明检测样品非该该种病害。