核糖核苷酸标记核酸检测

摘要

本申请提供了包含5’-尾的多核苷酸，所述5’尾具有用于靶核酸序列检测的序列段，以及它们应用于靶核酸检测的方法。所述的多核苷酸用于在一个或多个核糖核苷酸存在下扩增靶核酸的子序列。所述的核糖核苷酸以互补于5’-尾序列段的规则的间隔整合入扩增产物。扩增产物紧在整合的核糖核苷酸3’的键的切割，产生了指示靶核酸存在或不存在的可检测地不同的片段。

主权项

1、检测靶核酸的方法，所述的方法包括：(a)将靶核酸与多核苷酸、核苷酸集以及核苷酸整合生物催化组分接触，其中：(i)多核苷酸包含5’部分和3’部分，所述5’部分包含一个或多个邻接序列段，其中每个序列段包含至少3个核苷酸碱基，并且每个序列段的5’-末端核苷酸碱基在一个序列段内是独特的并在每个序列段内是相同的；并且3’部分包含足以与靶核酸杂交并在扩增条件下延伸的基本上互补的序列段；(ii)所述核苷酸集包含至少两种脱氧核糖核苷酸(dNTP)形式的核苷酸碱基，并且至少一种核苷酸碱基的大多数是核糖核苷酸(rNTP)形式，其中所述的核糖核苷酸碱基与所述多核苷酸每个序列段的独特5’核苷酸碱基互补；并且(iii)所述核苷酸整合生物催化组分包含脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸整合活性；(b)在扩增条件下扩增靶核酸以产生包含与所述多核苷酸5’-部分互补的3’序列段的扩增子，其中所述3’序列段包含一个或多个邻接序列段，其中每个序列段的3’-末端核苷酸碱基是具有与核苷酸集中NTP相同的碱基的核苷一磷酸(NMP)；(c)将每个NMP 3’的扩增子切割为片段，其中所述切割释放作为个别片段的序列段；以及(d)检测扩增子片段，其中检测的序列段片段指示靶核酸序列的扩增，从而检测面靶核酸序列。