发明名称 |
分子改造的嘌呤核苷磷酸化酶及其制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种分子改造的嘌呤核苷磷酸化酶及其制备方法。采用PCR技术从嗜热乳链球菌(Streptococcus thermophilus)中扩增嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)全长片段,用pET-43.1b(+)质粒载体构成pET-43.1b(+)-PNP重组载体,用定点突变的方法将片段第230位半胱氨酸突变为丙氨酸,用E.coli BL21(DE3)转化为工程菌。将工程菌发酵培养、诱导原核细胞表达,亲和层析纯化重组嘌呤核苷磷酸化酶。采用本发明得到的酶,热稳定性得到改良,并且可以提高产率,还可以缩短生产周期、降低成本。 |
申请公布号 |
CN101629169A |
申请公布日期 |
2010.01.20 |
申请号 |
CN200910101440.5 |
申请日期 |
2009.08.06 |
申请人 |
杭州利安生物科技有限公司 |
发明人 |
朱永良;闻树群 |
分类号 |
C12N9/12(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N;C12R1/46(2006.01)N |
主分类号 |
C12N9/12(2006.01)I |
代理机构 |
杭州求是专利事务所有限公司 |
代理人 |
张法高 |
主权项 |
1.一种分子改造的嘌呤核苷磷酸化酶,其特征在于是嘌呤核苷磷酸化酶突变体DNA序列的表达产物;突变体氨基酸序列是通过使SEQ ID N0.1所示的序列中230位半胱氨酸突变替换为丙氨酸,得到具有SEQ ID N0.2的氨基酸序列的嘌呤核苷磷酸化酶。 |
地址 |
310013浙江省杭州市玉古路122号(高新区) |