在生物介质中测定酶活性的方法

摘要

本发明提供了可靠、快速和方便的方法，在信号底物的存在下即时测定生物学介质中酶浓度的变化，其中对底物的消耗、信号的颜色依赖性以及信号底物的离去基团浓度与信号量之间的非线性进行了校正。该方法包括在适当的介质例如缓冲液中测量校正曲线，以确定被测量的曲线的特征。然后，这些特征允许在出现酶生成的介质的样品中，通过基于单点测定的数学方法，再次获得该完整的曲线或足够部分的曲线。该方法的大优点是不需要在每个个体介质中测量整个校正曲线，因为单点测定就已足够。

主权项

1. 在凝固的血浆中测定即时的凝血酶过程的方法，其包括下列步骤：a)将信号底物加入到含有预定量凝血酶活性的反应混合物中，所述信号底物在与所述凝血酶活性反应后，产生与所形成的转化产物相关的可检测信号；b)通过数学方法确定步骤a)中的即时信号曲线的特征，以便计算曲线的起始斜率，并对其曲率进行估算；c)在其中出现凝血酶生成的血浆中加入信号底物，所述信号底物在与凝血酶反应后产生与所形成的转化产物相关的可检测信号；d)向同样的样品或其中出现凝血酶生成的相同血浆的另一个样品中加入荧光化合物，提供可检测的信号，以供用作血浆引起的浊度和/或颜色对信号的影响的度量；e)将步骤d)中的测量结果与步骤a)中的测量结果进行比较，以建立一种相关性来校正其中出现凝血酶生成的血浆的浊度和颜色；以及f)使用在步骤b)中测定的1)的测量结果的曲率，来校正在其中测量信号的系统的非线性，并使用从步骤b)得到的起始斜率，从步骤c)中测量的信号来计算即时的凝血酶浓度。