茶叶的不耐热咖啡因组分以及该组分在将农杆菌介导的遗传转化引入植物的有效方法中的应用

摘要

本发明涉及一种不耐热咖啡因组分，该组分用于在植物系统中进行有效的农杆菌介导遗传转化以在植物中开发所需特性，同时涉及从茶叶中制备所述组分的方法，以及用所述茶叶的咖啡因组分将所述农杆菌属介导的遗传转化引入植物系统中的有效且费用低廉的方法。

主权项

1. 一种使用茶叶中不耐热咖啡因组分作为天然诱导剂用于在植物中进行根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化，在植物中产生所需特性的方法，所述方法包括以下步骤：i. 用10-40％的丙酮水溶液在室温下提取干燥的茶叶过夜，ii. 用n-己烷提取滤得的茶叶提取物以获得水性层和脂质层，iii. 用石油醚和乙酸乙酯提取水性层以从水性层中除去儿茶素，iv. 用氯仿提取步骤(iii)中的水性层以获得氯仿层，v. 评估氯仿层中总的咖啡因组分浓度，vi. 用过滤灭菌来灭菌咖啡因组分以获得所述的组分，vii. 把所述细菌接种到液态改良的酵母甘露醇肉汤，viii. 把接种体在25-30℃，在黑暗中150-200rpm培育约12-16小时，ix. 收集600nm下光密度0.6-0.8的培育接种体以得到处于细菌生长对数期的1×109细胞/ml从而获得沉淀，x. 将该沉淀悬浮于新鲜的酵母甘露醇肉汤但不损伤细菌细胞以获得悬液，xi. 把不同植物的外植体浸在细菌悬液中5-35分钟，xii. 在培育介质中以1-10天的不同时间培育外植体，xiii. 在新鲜的细菌培养物中使用浓度为0.5-300μg/ml的咖啡因组分以诱导vir基因，从而把带有转基因的Ti质粒转到植物中，以便用具有所需特性的基因遗传转化该植物。