一种用哺乳动物细胞高效分泌表达丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的方法

摘要

本发明涉及生物医药工程技术领域，全球HCV感染者约有1.7亿，70％以上的HCV感染会发展为慢性感染，HCV包膜蛋白E2介导HCV与靶细胞的结合，是涉及HCV感染性的最关键蛋白，而E2蛋白属于低表达蛋白，用基因重组方法获得哺乳动物细胞表达的该蛋白相当困难。本发明的目的在于提供一种用哺乳动物细胞高效分泌表达丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的方法，该方法构建了一种新型的哺乳动物细胞表达质粒，该表达质粒高水平表达目标基因E2蛋白，而低水平表达筛选标记谷氨酰氨合成酶。本发明能批量制备具有HCV包膜蛋白天然生物学功能以及抗原性的重组HCV包膜E2蛋白，为HCV感染的血清学检测试剂以及HCV疫苗的开发奠定了基础，并可以为HCV分子病毒学研究提供重要材料。

主权项

1.一种用哺乳动物细胞高效分泌表达丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的方法，其特征在于该方法构建了一种哺乳动物细胞表达质粒，该表达质粒将作为筛选标记的谷氨酰氨合成酶基因插入真核表达质粒载体pCI-neo的内含子基因的剪切供体与剪切受体位点之间，将丙型肝炎病毒包膜蛋白E2基因置于谷氨酰氨合成酶基因内含子之3′端；并将丙型肝炎病毒包膜蛋白E2与人免疫球蛋白信号肽融合表达；所述的哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞。