悬浮培养原生植株药用有效成份的铁皮石斛胚状体工艺

摘要

采用野外生长的铁皮石斛成株茎段休眠直接诱导胚状体，在1/2MS矿物成份，CH1000毫克/升(1/2MS.矿物盐类成份：2.5％蔗糖和0.5％麦芽糖为炭源、5％香蕉汁、B150mg/L、B650mg/L、NAA、BA适量的固体培养基)在90转/分回转式摇床上，29℃±1，自然室内光照条件下，经3－4个月连续筛选，获得8.4～9.2毫克/克·天，固液比达到25～35％，培养的胚状体细胞核DNA与原生植株细胞核DNA对比完全相同，多糖含量达16％以上，得干率10％以上的技术工艺流程，其上述技术参数周年稳定。

主权项

1. 一种经体外悬浮培养获得的铁皮石斛胚芽，其培养过程是：铁皮石斛带休眠芽茎段，经常规灭菌后，在超净台上切取带节的切段，插入到1/2MS.矿物盐类成份2.5％蔗糖和0.5％麦芽糖为炭源、5％香蕉汁、4.5克/升琼脂粉、PH5.8、NAA、BA适量的固体培养基上。29℃±1，自然室内光照条件，经45～50天后，在休眠芽上生长出浅绿色的起始胚状体。等到起始胚状体“球”长到黄豆粒大小时，小心地、及时地将胚状体球剥离外植体，放在相同的上述培养基上扩增。达到足够数量后，转入到上述培养基去掉琼脂粉的液体培养基中，进行悬浮培养，每个150毫升三角瓶装液75毫升，每瓶按5％(W/W)接种率接种；每7天继代一次；经3-4次继代后；进入筛选程序，从培养物中不断挑选出那些生长紧密、呈圆球状、浅绿色、增殖速度快的胚状体“球”，淘汰那些长成丛芽状或芽簇状的培养物。通过3～4个月的连续筛选，最终达到每10天收获一次，其“固液比”达到25～35％，多糖含量达到16％以上；“比生物生长速率”达到8.4～9.2毫克/克·天；并能保持周年稳定的成熟系。