双鼠李糖脂的产生菌筛选及制备方法

摘要

本发明公开了一种双鼠李糖脂的产生菌筛选及制备方法。即菌种筛选选择了长期被油脂污染的土壤样品作为菌源，采用了植物油作单一碳源的液体培养基富集后涂布选择性较强的十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板，依据菌落形态、长势挑选疑似菌种。初筛所得菌种发酵培养后测试表面活性，活性高的菌种采用TLC直接分析发酵液，选取双鼠李糖脂产量高的菌种。从筛选所得菌种发酵液中萃取法提取鼠李糖脂，柱层析分离得较纯双鼠李糖脂。本发明所用筛选方法准确度高，筛选所得菌株鼠李糖脂产量高，尤其双鼠李糖脂产量较高，制备工艺简单，克服了目前筛选方法中仅依靠鼠李糖脂总产量筛选而难以获得双鼠李糖脂高产菌的缺点。

主权项

1.一种双鼠李糖脂的产生菌筛选方法，包括以下步骤：a、选取被油脂污染的现场采集土壤样品作为菌种筛选源；b、样品浸泡处理后接种植物油作碳源的富集培养基，培养24～72h后得富集培养液；c、把富集培养液梯度稀释涂布于十六烷基三甲基溴化铵平板培养基培养24～96h，挑取长势好且数量多的单菌落斜面保种；d、挑取斜面保存的菌种接入发酵培养基培养48～120h后测定表面活性，选择活性较高的菌种发酵液上清进行TLC分析，展开剂为氯仿∶甲醇∶乙酸v/v/v＝65∶15∶2，苯酚硫酸显色剂显色，初步判断双鼠李糖脂含量，选择Rf值为0.46的斑点颜色浓重的菌种即双鼠李糖脂的产生菌保留，零下26℃甘油保存。