一种乳粉蛋白氮含量分析方法

摘要

本发明公开了属于蛋白质检测技术的一种乳粉蛋白氮含量分析方法。是根据色度学原理结合三氯乙酸可使蛋白质沉淀以及双缩脲试剂与蛋白质形成紫色络合物，即不同蛋白质含量的样品经三氯乙酸使蛋白氮沉淀后，蛋白氮在碱性条件下与双缩脲试剂形成深浅不同的蓝紫色的络合物，其色度值与蛋白质含量高低呈线性相关，用计算机软件自动分析获得与通过分光光度计测定吸光度值比较，然后计算蛋白质含量。使本发明利用普通的办公用计算机与扫描仪代替了实验室专用的精密仪器一分光光度计，在测定精度、时间、成本与操作步骤上省去了人工绘制标准曲线的步骤，操作快速简便，需要的仪器设备少，成本低，对测定的环境条件要求低，无污染尤其适合乳粉大批量的检测。

主权项

1.一种乳粉蛋白氮含量分析方法，其特征在于，该方法是根据色度学原理，结合三氯乙酸使蛋白氮沉淀后，不同含量的蛋白氮在碱性条件下与双缩脲试剂形成深浅不同的蓝紫色的络合物，其色度值与蛋白氮含量高低呈线性相关的方法，用计算机软件自动分析获得样品色度值，然后计算蛋白氮含量，具体步骤如下：步骤1：配制显色反应所用的双缩脲试剂：(1)配制1～10mol/L的碱性溶液；按m/v浓度配制15～35％的酒石酸钾钠溶液和2～6％的CuSO4·5H2O溶液；(2)在蒸馏水中按体积比，碱性溶液∶酒石酸钾钠溶液∶硫酸铜溶液和双缩脲试剂总量＝1∶1.5～3∶3～5∶100的比例配制双缩脲试剂，先分别加入步骤(1)中碱性溶液、酒石酸钾钠溶液和硫酸铜溶液，混合，后添加蒸馏水，使配制成的双缩脲试剂总量为碱性溶液体积的100倍定容，其中，酒石酸钾钠为稳定剂，用于使双缩脲试剂性状稳定；步骤2：分别称取已知蛋白质含量的乳粉标样和待测样；步骤3：制备标样与待测样品的显色液：将所称取的样品放入离心管中，加入水和三氯乙酸，使三氯乙酸最终浓度为5％～50％，放置使蛋白充分沉淀，离心后弃去上清液，向离心管中加入四氯化碳和双缩脲试剂，振荡使沉淀充分溶解，避免结块，静置使之稳定显色，移取适量的显色液体至离心管中离心；步骤4：采集图像：离心后的标样和试样各取等量澄清液体至比色池中，将比色池置于扫描仪上，启动扫描仪采集图像；步骤5：读取蛋白氮含量，利用计算机系统读取图像采集器采集到的原始图像信息；点击“检测”菜单中的“参数设置”，根据提示输入标样的标号和标样的蛋白质含量；根据标样的色度值和蛋白氮含量，利用乳粉蛋白质测定软件自动绘制标准曲线和采集待测样品的色度值，采用回归方程计算待测样品蛋白氮的含量，初始参数确定后点击“结果”，比较后确定检测样品的蛋白氮含量，并根据需要打印输出。