重组人His－TT－B7－H1IgV肿瘤疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种重组人His－TT－B7－H1IgV肿瘤疫苗，利用人工合成的方法获得TT_830－843－B7－H1IgV区基因片段，将其插入pQE－30原核表达载体，转化大肠杆菌。在大肠杆菌中获得高效表达，经纯化后得到His－TT－B7－H1IgV蛋白，本发明的重组人His－TT－B7－H1IgV蛋白通过免疫小鼠产生抗B7－H1抗体，并且该抗血清能够在体外依赖补体杀伤表达B7－H1的肿瘤细胞。应用该蛋白免疫小鼠不仅可对荷瘤小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的生长起到一定的抑制作用，同时还可延长荷瘤小鼠的生存期。从而有可能为肿瘤的免疫治疗提供一种新的蛋白质药物。该肿瘤疫苗的应用目的在于以B7－H1为靶点获得一种能够促使小鼠体内产生针对B7－H1分子的中和抗体的肿瘤疫苗，从而研究应用主动免疫的方法进行肿瘤的免疫治疗。

主权项

1.一种重组人His-TT-B7-H1IgV肿瘤疫苗，其特征在于，利用人工合成的方法获得TT830-843-B7-H1IgV区基因片段，在上游引入BamHI酶切位点，下游引入SalI酶切位点，将其插入pQE-30原核表达载体，转化大肠杆菌，在大肠杆菌中获得高效表达，经纯化后得到rhHis-TT-B7-H1IgV蛋白，在体外能够竞争性抑制B7-H1/Fc蛋白与抗B7-H1单抗的结合；其TT830-843-B7-H1IgV区的氨基酸序列为：Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile ThrGlu Ala Ala Ala Glu Phe Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly SerAsn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu AspLeu AlaAla Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn IleIle Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His SerSer Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser LeuGly Asn Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp AlaGly Val Tyr Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr LysArg Ile Thr Val Lys Val Asn。