引物的设计方法、目标核酸的检测方法、单碱基突变的检测方法以及检测试剂盒

摘要

本发明的目的在于提供用于改善LAMP扩增产物和探针的杂交效率以得到能够更加精确地进行检测的LAMP扩增产物的LAMP引物的设计方法。本发明提供的引物设计方法为通过使利用多个引物将目标核酸扩增的扩增产物与探针核酸杂交而进行检测的方法，其特征在于，相对于目标核酸，从其5’末端侧开始依次规定F3区域、F2区域和F1区域，并从其3’末端侧开始依次规定B3c区域、B2c区域和B1c区域，进而在从上述F2区域至F1区域的部分上规定FP区域和/或在从上述B2c区域至B1c区域的部分上规定BPc区域，按照上述FP区域和上述F2区域和/或上述BPc区域和上述B2c区域具有至少大于等于10个碱基的非重复部分且重复部分小于等于10个碱基的方式对各区域进行规定来设计引物。

主权项

1、一种引物的设计方法，该方法用于通过使利用多个引物将目标核酸扩增而得到的扩增产物与探针核酸发生杂交而进行测定，其特征在于，所述目标核酸从5’末端侧开始依次具有F3区域、F2区域和F1区域，并从3’末端侧开始依次具有B3c区域、B2c区域和B1c区域，进而在从所述F2区域至F1区域的部分上具有FP区域、和/或在从所述B2c区域至B1c区域的部分上具有BPc区域；所述探针核酸是具有与选自所述FP区域的序列、所述BPc区域的序列以及它们的互补序列中的序列相互补的碱基序列的大于等于一种的探针核酸；当所述多个引物为在3’末端侧具有与所述F2区域相同序列且在5’末端侧具有与所述F1区域互补序列的FIP引物、具有与所述F3区域相同序列的F3引物、在3’末端侧具有与所述B2c区域互补序列且在5’末端侧具有与所述B1c区域相同序列的BIP引物、以及具有与所述B3c区域互补序列的B3引物时，按照所述FP区域和所述F2区域、和/或所述BPc区域和所述B2c区域具有至少大于等于10个碱基的非重复部分且重复部分小于等于10个碱基的方式对各区域进行规定来设计引物。