通过二硫化物交联进行体外蛋白质合成的方法

摘要

本发明的目的是提供一种用重构的蛋白质合成系统简便高效地合成含二硫键的蛋白质的方法。已知具有活性的蛋白质可通过使用含有纯化组分的重构蛋白合成系统合成获得，其中可影响氧化还原状态的酶和底物被除去，并可对二硫化物和硫醇的氧化还原的平衡进行人工调节。这种系统可代替含有多种维持还原状态酶和底物，例如硫氧还蛋白还原酶[EC 1.6.4.5]和谷胱甘肽还原酶[EC 1.6.4.2]等的细胞提取物或粗组分的、难以调节氧化还原状态的系统。

主权项

1.一种合成具有分子内或分子间二硫键的蛋白质的方法，包括使用包含以下a)，b)，和c)和/或d)的反应系统：a)至少一个编码目标蛋白的模板核酸；b)包含多种具有特定存在量和纯度的组分的、在加入模板核酸后可合成由模板核酸编码的蛋白质的蛋白质合成反应基本试剂；c)至少一种具有特定存在量和纯度的、可催化二硫键氧化还原的氧化还原酶；及d)至少一种具有特定存在量和纯度的调节二硫键氧化还原状态的氧化还原试剂。