一种提取荒漠藻多糖的方法

摘要

本发明公开了一种提取荒漠藻多糖的方法。首先是配制荒漠藻培养液：采用硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙、柠檬酸、柠檬酸铁铵、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)、碳酸钠，微量元素溶液A₅按比例配制；其次是荒漠藻的培养：控制温度、光强、光质、培养液通气条件；第三是荒漠藻粉的制备；第四是荒漠藻多糖的提取；第五是荒漠藻多糖的纯化、收获与干燥。本发明方法易行、操作方便、设备简单、产量高、产品质量好、安全可靠，适用于工业化规模生产。

主权项

1、一种提取荒漠藻多糖的方法，包括如下步骤：A、培养液的配制：按每升水加入硝酸钠0.8-2.5g、磷酸氢二钾0.02-0.05g、硫酸镁0.06-0.09g、氯化钙0.02-0.05g、柠檬酸0.004-0.008g、柠檬酸铁铵0.004-0.008g、乙二胺四乙酸二钠盐0.001-0.003g、碳酸钠0.01-0.04g，微量元素溶液A50.5-2ml；B、荒漠藻的培养：首先是一级培养，由试管原种接入三角瓶中，通气培养时，调节气流在1.5-3.5L.min-1，气流经过棉花球进行无菌处理，光强控制在65-85μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，转入到二级培养；其次是二级培养，将一级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在2.5-5L.min-1，无菌处理，光强控制在75-95μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，转入到三级培养；第三是三级培养，将二级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在3-6L.min-1，无菌处理，光强控制在70-100μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，为继续培养的接种种源；第四是继续培养，首先是循环培养池培养，采用三级培养后所得的藻种，接入开放式跑道循环培养池，按每升培养液0.2-0.5g湿重的比例接入，采用玻璃温棚控制温度在22-35℃，利用自然光进行光照，采用遮荫网控制光照强度在120-180μE.m-2.s-1，叶轮或潜水泵搅动培养基；其次是循环培养池培养，将循环培养池中培养4-7天的荒漠藻转接到循环培养池中，按循环培养池中培养液的体积比为1∶20-25进行扩大；C、荒漠藻粉的制备：将培养10-20天后的荒漠藻用泵抽到过滤装置——振动斜面筛上，经过振动斜面筛后，收得荒漠藻藻浆，然后将藻浆经过离心机离心，获得荒漠藻藻泥，经浓缩、脱水、干燥、粉碎后得到荒漠藻粉；D、荒漠藻多糖的抽提：向荒漠藻粉中加入7-10倍重量的蒸馏水，搅匀，然后在70-90℃下，利用搅拌器不停地搅拌抽提3-5小时，在离心机中，5000-8000g离心10-15min，收集上清液，向上清液中加入等体积的氯仿—正丁醇4-7∶1v/v溶液，振荡20-30min，5000-8000g离心10-15min，收集藻多糖溶液，加入3-5倍体积的预先冷冻到0-4℃的无水乙醇，摇匀，静置10-20min，析出的白色絮状沉淀物即为荒漠藻多糖，5000-8000g离心5-10min收集多糖；E、纯化、收获与干燥：首先是纯化，将上述所得粗多糖溶于4-6倍蒸馏水中，用10-15倍0-4℃冷的无水乙醇洗涤；其次是收获，将上述溶液在离心机中12000-15000g离心5-10min，收集沉淀物；第三是干燥，将收集到的多糖沉淀物在-100℃下冷冻干燥，得多糖产品。