靶向性共表达新型p53和p53AIP1的重组腺病毒

摘要

本发明叙述了一种构建靶向性共表达新型肿瘤抑制基因p53和p53调控的细胞凋零诱导蛋白基因(p53AIP1，下同)的表达盒结构的重组腺病毒的方法及其用途和意义，其主要特征为1)野生型P53抑癌基因的第72位氨基酸由脯氨酸突变成为精氨酸，其他氨基酸组成及其排列顺序不变；2)通过内部核糖体结合位点将新型肿瘤抑制基因p53和p53AIP1基因连接；3)该表达盒的启动子由肿瘤特异性启动子PEG－3来驱动；4)该重组腺病毒是复制缺陷型的血清A5型腺病毒。该新型腺病毒具有靶向性共表达二种抗癌基因，即新型肿瘤抑制基因p53和p53AIP1基因，其产物具有更强细胞凋亡生物功能，但对正常细胞不会造成损伤。因此，在肿瘤，尤其是恶性肿瘤的基因治疗中将具有重要意义。

主权项

1，一种靶向性共表达新型p53和p53AIP1的重组腺病毒。本发明使用的腺病毒载体为Stratagene公司的产品AdEasy-1载体，为E1和E3区缺失的腺病毒载体。本发明构建的表达盒由肿瘤特异性动子、新型p53、IRES、p53AIP1和SV40多聚腺嘌呤组成，其主要特征为：a).人野生型p53抑癌基因的第72位氨基酸由脯氨酸突变成为精氨酸，其他氨基酸组成及其排列顺序不变；b).P53抑癌基因在其N-末端以内切酶EcoR V和C-末端以内切酶Not1片段拼接于pIRES质粒上游；c).p53AIP1基因在其N-末端以内切酶Sma1和C-末端以内切酶Xba 1片段拼接于pIRES质粒下游；d).肿瘤特异性启动子在其N-末端以内切酶Nru1和C-末端以内切酶EcoRV片段拼接于新型p53基因的上游；经重组后，该表达盒位于腺病毒载体的E1缺失区。该重组腺病毒具有靶向性共表达p53和p53AIP1的作用，因而具有更强细胞凋亡功能、抗癌谱更广的生物功能。