重建胚胎中核转移后融合和活化的方法和系统

摘要

本发明提供了数据证明不成功初次同时电融合和活化事件后，哺乳动物细胞核与去核的体内排出的卵母细胞的再次融合，提供了建立用于产生各种非人哺乳动物物种包括山羊、猪、啮齿动物、灵长目、兔和牛的活后代的活化和融合的能核转移的胚胎的另外的替代方法和改进。另外，多次电脉冲在动物核转移程序中产生有活力后代的同时融合活化方法学提供了替代的和更有效的活化方法。

主权项

1.一种通过核转移方法克隆非人哺乳动物的方法，包括(i)获得待用作供体核来源的目的分化哺乳动物细胞；(ii)从与供体核来源细胞相同的物种的哺乳动物获得至少一个卵母细胞；(iii)将所述至少一个卵母细胞去核；(iv)将目的分化细胞或细胞核转移至去核的卵母细胞中；(v)同时融合和活化细胞偶联体，形成第一转基因胚胎；(vi)通过提供至少一个另外的活化方案，包括另外的电休克，来活化没有融合产生第一转基因胚胎，但在初次电休克后被活化的细胞-偶联体，形成第二转基因胚胎；(vii)培养所述的活化的第一和/或第二转基因胚胎直到超过2细胞发育阶段；和(viii)将所述第一和/或第二转基因胚胎转移至宿主哺乳动物中，使得该胚胎发育为胎儿。