基于引物的核酸的多重扩增的方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种诊断或鉴别诊断疾病病原体和第二疾病病原体的新方法。所述公开的方法使用新的被称为TemPCR的扩增策略来容许从任何已知其核酸序列的疾病病原体和/或第二疾病病原体的灵敏性和特异性扩增靶序列。该TemPCR方法使用至少一组特异于待检测的疾病病原体或第二疾病病原体的靶序列富集引物(以低浓度存在)和至少一对共用靶序列扩增引物(以高浓度存在)。至少一对所述靶序列富集引物包括对于靶序列扩增引物的结合序列。因此，使用TemPCR方法容许进行多重扩增反应而不需要以经验优化多重扩增参数。还公开了与TemPCR方法一起使用的核酸分离和靶序列检测的方法。

主权项

1.一种基于多重引物扩增的方法，其中所述方法包括在反应混合物中进行所述扩增，所述反应混合物包含至少第一和第二对靶序列富集引物和至少第一对靶序列扩增引物，所述靶序列扩增引物包含FSP和RSP，所述方法包括：a.第一扩增反应，其使用i)来自至少一种病原体的核酸作为模板，所述核酸包含来自所述病原体的至少一个靶序列；ii)所述第一对靶序列富集引物与所述核酸杂交并且将所述至少一个靶序列包括在内；iii)所述第二对靶序列富集引物与所述核酸杂交，并且将所述至少一个靶序列包括在内，所述第二对靶序列富集引物位于最接近至少一个靶序列位置，并且第二对靶序列富集引物的每一个在其5′末端包含对应于靶序列扩增引物的一个的序列的超级引物结合标志物；和iv)对于所述第一扩增反应的扩增试剂和条件从而使第一扩增反应产生多个第一扩增产物，其中第一扩增产物的至少一个部分包含超级引物结合标志物的至少一个补体由此形成至少一个超级引物结合位点；和b.第二扩增反应，其使用i)包含所述至少一个超级引物结合位点的第一扩增产物的所述部分作为模板；ii)所述第一对靶序列扩增引物结合于在第一扩增产物的所述部分上的所述超级引物结合位点；和iii)用于所述第二扩增反应的扩增试剂和条件从而使第二扩增反应产生多个包含至少一个靶序列的第二扩增产物。