具有杀线虫功能的秀丽单顶孢菌剂及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种具有杀线虫功能的秀丽单顶孢菌剂及其制备方法和应用，属微生物农药技术领域。本菌剂的生产菌株为秀丽单顶孢(Monacrosporiumelegans)，YMF1.00027，采用常规方法制备，其中液体发酵培养基配方为：0.1％葡萄糖，0.1％硫酸铵，0.05％硫酸镁，100g土豆煮成汁，0.001％硫酸亚铁，用水补充体积至1L，pH 6.5。从液体发酵产物中提取杀线虫有效成分的方法是，将发酵培养物进行过滤处理，上清液用硫酸铵进行浓缩处理即可做为杀线虫的药液。本发明的菌剂对Panagrellus redivivus线虫和松材线虫具有效高的毒力，有较好的应用前景。

主权项

1、一种具有杀线虫功能的秀丽单顶孢菌剂，其特征在于：(1)生产菌株为秀丽单顶孢(Monacrosporium elegans)YMF1.00027，保藏登记入册的编号为CGMCC No.1310；(2)秀丽单顶孢菌剂经由如下步骤得到：a.试管种培养将YMF1.00027菌丝体接种到1％葡萄糖；100g土豆煮成汁，1.8％琼脂；pH6.5培养基上，在22℃下培养8天获得试管种；b.液体扩大培养每个250ml三角瓶分装60ml培养液，并加入少量的线虫作为诱导物，在121℃灭菌20分钟，接入试管种，再在200rpm的摇床中于26℃温度下培养6天；培养液为：0.1％葡萄糖，0.1％硫酸铵，0.05％硫酸镁，100g土豆煮成汁，0.001％硫酸亚铁，用水补充体积至1L，pH 6.5；c.杀线虫活性成分的提取将发酵培养物过滤，收集上清液，按1∶0.56的比例加入硫酸铵，于4℃静置2小时，然后在于8000rpm/min离心30分钟，弃上清；用50mM磷酸缓冲液重新溶解，50mM磷酸缓冲液为：39ml的50mM磷酸二氢钠加61ml的50mM磷酸氢二钠，pH为7.0；将重新溶解所获溶液装入MW：8,000-14400KDa的21mm透析袋中，于50mM磷酸缓冲液中透析3-4次，每次3小时，即得杀线虫药液，将药液保存于4℃冰箱中待用。