一种红曲发酵产品中桔霉素含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种红曲发酵产品中桔霉素含量的检测方法。它包括以下步骤：(一)样品色价测定步骤；(二)试样前处理步骤，包括：(1)样品中桔霉素的提取步骤：试样称取；加入甲醇提取液；混匀超声提取，离心提取；室温下减压浓缩；(2)粗分离所需吸附层析柱的制备步骤：包括以甲醇洗涤后的中性吸附树脂装柱；(3)样品中桔霉素的粗分离步骤；(三)液相色谱条件的确定步骤；(四)色谱分析步骤；(五)标准溶液的配制与标准曲线的制备步骤；(六)结果计算步骤。本发明具有提取溶剂简单、毒性小、桔霉素的稳定性高、样品中的桔霉素提取充分、液相色谱分析的灵敏性高、测定时间短等特点。

主权项

1.一种红曲发酵产品中桔霉素含量的检测方法，它包括以下步骤：(一)、样品色价测定步骤；(二)、试样前处理步骤，包括：(1)样品中桔霉素的提取步骤：将试样充分混合均匀，准确称取0.1～5.0g，即按色价50相当1g样品量再乘以5计算所称样品重量，放于50mL容量瓶中；按称样量1∶10(W/V)比例加入95％甲醇提取液，混合均匀，超声提取40min，静置澄清，上清液移至圆底烧瓶中平；往沉淀中按大约1∶8(V/V)比例加入95％甲醇，超声提取20min，静置澄清后将上清液合并至圆底烧瓶中；沉淀同前法加入95％甲醇，再超声提取20min，转入离心管中，3500rp/min离心10分钟，将上清液倒入圆底烧瓶中与前两次提取液合并；将圆底烧瓶中所合并的提取液在室温下减压浓缩，将全部浓缩液取至5mL刻度试管中，读取体积备用；(2)粗分离所需吸附层析柱的制备步骤：取适量中性吸附树脂以甲醇洗涤3次，再用蒸馏水洗涤3次，装入1×20cm的柱子，柱床高度为10-15cm；用两个柱床体积的蒸馏水清洗平衡后备用；(3)样品中桔霉素的粗分离步骤：取1/5-1/2的样品浓缩液上柱，以70％甲醇洗脱，收集前20mL-25mL洗脱液，混合均匀后以0.45μm孔径微孔滤膜过滤，滤液待进样；(三)、液相色谱条件的确定步骤中，液相色谱条件为：色谱柱：C18柱4.6×250mm 5μm柱温：28℃荧光检测器：λex＝331nm，λem＝500nm流动相：乙腈∶水＝50∶50流速：1.0mL/min进样量：20μl；(四)、色谱分析步骤，包括：将处理好的试样提取液20μl进样，经荧光检测器检测得到色谱图后，外标法以标准桔霉素保留时间定性，将试样提取液中色谱峰面积与标准样品色谱峰面积比较定量；(五)、标准溶液的配制与标准曲线的制备步骤，包括：配制浓度为0.0002、0.001、0.004、0.04、0.1μg/mL桔霉素标准溶液，在下述色谱条件下进样测定，以峰面积对浓度作标准曲线：色谱柱：C18柱4.6×250mm 5μm柱温：28℃荧光检测器：λex＝331nm，λem＝500nm流动相：乙腈∶水＝50∶50流速：1.0mL/min进样量：20μl；(六)、结果计算步骤，所用公式为：$X=\frac{h_1\times c\times 20\times 5}{h_2\times m}\times 1000$ 式中：X-试样中桔霉素含量，μg/Kg h1-试样中桔霉素色谱峰面积 c-标准桔霉素溶液浓度，μg/mL 20-洗脱体积，mL 5-1/5取样倍数 1000-单位折算倍数(g至Kg) h2-标准桔霉素色谱峰面积m-试样称取量，g。