提高棉花花粉管通道导入基因转化率的方法

摘要

本发明涉及一种提高棉花花粉管通道导入基因转化率的方法，属于生物技术领域。采取正交试验设计，探讨了不同缓冲液成分对棉花花粉管通道导入外源总DNA或者质粒DNA转化率的影响，筛选出了适宜提高棉花花粉管通道导入基因转化率的缓冲液配方，其主要成分是在TE缓冲液中加入0.01μg·μl^-1-0.05μg·μl^-1.甲基磺酸乙酯(ethyl methane sulfonate，简称EMS，Sigma公司产品)。利用花粉管通道技术，将含有IPT基因的表达载体pBG121导入不同的陆地棉品种(中棉所10号、中棉所24号和中棉所36号)中，比较改进缓冲液和传统缓冲液对棉花转化率的影响，应用结果表明：使用改进缓冲液的棉花平均转化率比传统的缓冲液的平均转化率提高了两倍。

主权项

1、一种提高棉花花粉管通道导入基因转化率的方法，其特征在于，在通过花粉管通道技术将外源DNA导入棉花花粉管时所使用的导入转基因液由TE缓冲液、外源质粒DNA、甲基磺酸乙酯组成，所述TE缓冲液的各组分的浓度为：三羟甲基氨基甲烷-盐酸为10mmol/L，乙二胺四乙酸二钠为0.5mmol/L，氯化钠为10mmol/L；所述外源质粒DNA的浓度为0.01μg·μl-1-0.02μg·μl-1；所述甲基磺酸乙酯的浓度为0.01μg·μl-1-0.05μg·μl-1；每朵花导入转基因液的总体积为10-15μl。