蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法

摘要

本发明公开了一种蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法，采用高效液相色谱法，得出了蟾酥类特有的蟾毒色胺类及蟾毒配基类化学指纹图谱；利用高效液相色谱仪，UV检测器，色谱工作站，取待测蟾酥样品25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.2μm滤膜即得蟾酥类供试品溶液。将待测蟾酥供试品溶液，在分析柱，流动相：甲醇(A)－缓冲液，进行梯度洗脱，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属。本方法能准确地测出蟾酥类的高效液相色谱指纹图谱，从而为鉴别蟾酥的真伪和制定蟾酥药材和蟾酥注射液质量标准提供可靠的科学依据。

主权项

1.蟾酥类高效液相色谱指纹图谱鉴定方法，使用高效液相色谱仪、UV检测器以及相应的色谱工作站，其特征在于：采用4.6×250mm，5μmPhenyl-Hexy分析柱，流动相：甲醇做为A-一定配比的庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠、柠檬酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液组成的缓冲液做为B，按以下程序梯度洗脱，梯度洗脱程序： 时间(min) A(％) B(％) 0 30 40 90 100 12 12 50 60 12 88 88 50 40 88流速为1.0ml/min，检测波长296nm，蟾酥类供试品溶液，精密称定蟾酥细粉25mg，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，进样量20μl，保留时间90min，即得到蟾酥类各自特有的化学指纹图谱，包括蟾毒色胺类和蟾毒配基类特征峰，并对所有特征峰全部或大部分进行化学归属，通过该方法能快速准确地鉴别不同来源的蟾酥类，可作为蟾酥及蟾酥注射液质量控制的标准。