PVA－SbQ的合成及对乙酰胆碱酯酶的固定

摘要

一种PVA－SbQ的合成及对乙酰胆碱酯酶的固定。解决现有技术存在乙酰胆碱酯酶的活力回收率低、活性保持期短的问题。PVA－SbQ的合成是以对苯二甲醛、γ－甲基吡啶为原料经沸水浴回流后，加酸除去剩余对苯二甲醛并将滤液调至中性收集黄色沉淀，与硫酸二甲酯反应后得到SbQ，与PVA溶液混合在微酸性条件下搅拌得PVA－SbQ。对乙酰胆碱酯酶的固定是以PVA－SbQ的磷酸缓冲液为固定液，加入乙酰胆碱酯酶粉混合均匀；吸取20μL于96孔酶标板的板孔中，紫外灯下聚合后将酶标板移入4℃冰箱中放置隔夜，待孔中缓冲液干燥后即可将酶固定住。与其它方法相比，本发明简单易行，经固定化以后的乙酰胆碱酯酶不易渗出、酶的活性保存期可被延长至半年以上，而且酶的活力回收率与其它方法相比有较大提高。

主权项

1、一种光交联树脂PVA-SbQ的合成方法，其特征是该方法包括：——分别取0.2～0.4M对苯二甲醛、0.1～0.2M γ-甲基吡啶、25～30mL醋酸酐、10～12mL冰醋酸混合均匀，沸水浴加热回流6～8小时；——向上述溶液中加入300mL 1.0M HCl静置1～2小时，过滤除去沉淀物；——滤液加热至30～40℃，用苯萃取，弃去苯溶液，用NaOH将滤液调至中性；——过滤收集黄色沉淀，水洗凉干即得到对甲酰苯乙烯吡啶，滤渣溶于80～90℃乙酸乙酯中，不溶物过滤除去。——加入硫酸二甲酯50mL，放置隔夜，过滤；——收集滤渣即得1-甲基-2-(对甲酰苯乙烯基)吡啶甲硫酸盐(SbQ)，分别用甲醇和丙酮洗涤，P2O5干燥后避光保存；——取4～5g SbQ和6～8mL85％磷酸，加入聚乙烯醇(PVA)溶液中(50gPVA溶于600mL蒸馏水中配制而成)；——室温避光搅拌24h后，缓慢倾入丙酮中，过滤收集黄色沉淀；——甲醇洗涤，经干燥后即得PVA-SbQ。