通过分子伴侣的共分泌制备天然折叠的和分泌的蛋白质的方法

摘要

一种制备含有两个或几个通过二硫键连接的半胱氨酸的天然折叠的真核多肽的方法，该方法包括：a)培养原核细胞，其中，所说的原核细胞含有一种表达载体，该载体编码所说的在N-末端含有一种原核信号序列的多肽，b)将该多肽分泌至周质中或培养基中，c)切割信号序列，并从周质或培养基中分离该多肽，其中，在所说的原核细胞中还表达一种编码一种分子伴侣的核酸，并且该分子伴侣被分泌至周质中，该方法适用于在原核细胞中高产率地重组生产。

主权项

1.一种制备含有两个或几个通过二硫键连接的半胱氨酸的天然折叠的真核多肽的方法，该方法包括：a)培养原核细胞，其中，所说的原核细胞含有一种表达载体，该载体编码所说的在N-末端含有一种原核信号序列的多肽，b)将该多肽分泌至培养基中，c)切割信号序列，并从培养基中分离该多肽，其中，在所说的原核细胞中还表达一种编码sHsp型的小热休克蛋白质或者一种具有分子量约40kDa的Hsp40型的热休克蛋白质作为胞质分子伴侣的核酸，并且该分子伴侣被分泌至周质中，其先决条件是，培养是在没有精氨酸或一种通式IR2-CO-NRR1 (I)的化合物的存在下进行的，其中，R和R1表示氢或一种饱和的或不饱和的支链或非支链的C1-C4烷基链和R2表示氢，NHR1或一种饱和的或不饱和的支链或非支链的C1-C3烷基链和所述培养是用以0.1-15mmol/l的浓度添加到培养基中的还原硫醇试剂进行的。