一种复性蛋白质的方法

摘要

本发明涉及一种采用渗透质和疏水层析的组合系统复性蛋白质的方法。基本过程为将变性蛋白质采用高浓度盐和变性剂梯度吸附到疏水层析柱上，然后用一定浓度的渗透质洗脱，使蛋白质在洗脱过程中逐渐复性，正确折叠而形成天然活性蛋白质。本发明的方法不仅操作简便，便于大规模应用，而且可以获得高浓度的活性蛋白质并保持很高的蛋白回收率及活性回收率。

主权项

1.一种复性蛋白质的方法，利用疏水层析和渗透质的组合系统进行，包括如下步骤：(1)柱平衡：用流动相I平衡常规疏水层析介质；其中所述的流动相I为3.6M(NH4)2SO4，50mM Tris-HCl，1mM EDTA，3mM GSH，0.3mM GSSG，pH8.5，或是3.6M(NH4)2SO4，50mM Tris-HCl，1mMEDTA，0.1％2-巯基乙醇，pH8.5，或是0.1N醋酸；(2)变性蛋白质的吸附：用含0～200mM还原剂的4～10M脲或2～7M盐酸胍的变性缓冲液溶解包涵体或天然蛋白质，吸附到流动相I平衡的疏水层析柱上；(3)变性蛋白质的洗脱复性：洗脱步骤(2)中吸附的包涵体蛋白质或变性的天然蛋白质时，先采用流动相II和含1～70％(V/V)的渗透质的洗脱液冲洗层析柱，然后运行流动相II～变性剂C的梯度0.4个柱体积，使疏水柱中环境的亲水性由上至下依次增强，再改变梯度方向运行变性剂C～流动相II的梯度0.4个柱体积，最后继续用流动相II和含1～70％(V/V)的渗透质的洗脱液洗脱，使蛋白质解吸并逐渐形成天然结构；洗脱流速为0.1个柱体积/min；所述的变性剂为8M脲，50mM Tris-HCl，1mM EDTA，3mM GSH，0.3mM GSSG，pH8.5；或是6M盐酸胍，50mM Tris-HCl，1mM EDTA，1％2-巯基乙醇，pH8.5；8M脲，50mMTris-HCl，1mMEDTA，0.1％2-巯基乙醇，pH8.5；或是8M脲，10mM Na2HPO4，0.01％2-巯基乙醇；所述的流动相II为0.4M(NH4)2SO4，100mM Tris-HCL，1mMEDTA，0.1％2-巯基乙醇，pH8.5；或是0.2M NaCl，20mM Na2HPO4，0.01％2-巯基乙醇；所述的渗透质为多羟基醇，聚乙二醇或氨基酸。