假单胞菌Na<SUP>+</SUP>/H<SUP>+</SUP>逆向转运蛋白基因及其克隆方法

摘要

假单胞菌Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因及其克隆方法，涉及一种基因克隆。提供一种假单胞菌的Na⁺/H⁺逆向转运蛋白结构基因及一种既快捷又经济的克隆方法，基因长1089bp，编码362个氨基酸。步骤为将极端耐盐假单胞菌接种，培养；提取总DNA；设计引物；PCR反应并将扩增产物凝胶成像系统扫描记录，切下扩增的约1.1kb的条带；在PCR产物末端加上一个腺嘌呤脱氧核糖核苷酸(A)，弃上清液，加入20μL重蒸水溶解DNA；载体与DNA的连接，形成单菌落；挑选白色菌落，碱裂解法提取重组质粒；鉴定所扩增的目的基因；检测转化子的耐盐水平；转化子中的重组质粒经鉴定，对其中的克隆基因进行测序；判断克隆基因。

主权项

1、假单胞菌Na+/H+逆向转运蛋白基因，其特征在于其序列如下：1 ATGATTATGGCCAACAGCGGCGCAACCAGTGGATGGTATCACGACTTTCTGGAGACGCCG 6061 TTCACTCGGTTGGTTCACTCGAAATCAAGCAAAAACATGCTGTTATGGATAAATGACGCG 120121 CTGATGGCGGTATTTTTCCTGTTAGTCGGTCTGGAAGTTAAACGTGAACTGATGCAAGGA 180181 TCGCTAGCCAGCTTACGCCAGGCCGCATTTCCAGTTATCGCCGCTATTGGTGGGATGATT 240241 GTGCCGGCATTACTCTATCTGGCTATTAACTATGCCGATCCGATTACCCGCCAAGGGTGG 300301 GCGATCCCGGCGGCTACTGACATTGCTTTTGCACTTGGTGTACTGGCGCTGTTGGGAAGT 360361 CGTGTTCCGTTTGCGCTGAAGATCTTTATGATGGCTCTGGCTATTATCGACGATCTTGGG 420421 GCCATCATTATCATCGCATTGTTCTACACTAATGACTTATCGATGGCCTCTCTTGGCCTC 480481 GCGGCTGTAGCATTTGCGGTACTCGCGGTATTGAATCTGTGTGGTGCACGCCGCACGGGC 540541 GTCTATATTCTTGTTGGCGTGGTGTTGTGGACTGCGGTGTTGAAATCGGGGGTTCACGCA 600601 ACTCTGGCGGGGGTAATTGTCGGCTTCTTTATTCCTTTGAAAGAGAAGCATGGGCCTTCT 660661 CCAGCGAAGCGACTGGAGCATGTGTTGCACCCGTGGGTGGCGTATCTGATTTTGCCGCTG 720721 TTTGCATTTGCTAATGCTGGCGTTTCACTGCAAGGCGTCACGCTGGATGGCTTGACCTCC 780781 ATTCTGCCATTGGGGATCATCGCTGGCTTGCTGATTGGCAAACCGCTGGGGATTAGTCTG 840841 TTCTGCTGGTTGGCGCTGCGTTTGAAACTGGCGCATCTGCCTGAGGGAACGACTTATCAG 900901 CAAATTATGGTGGTGGGGATCGTGTGCGGTATCGGTTTTACTATGTCTATCTTTATTGCC 960961 AGCCTGGCCTTTGGTAGCGTAGATCCAGAACTGATTAACTGGGCGAAACTCGGTATCCTG 10201021 GTCGGTTCTATCTCTTCGGCGGTAATTGGATACAGCTGGTTACGCGTTCGTTTGCGTCCA 10801081 TCAGTTTGA 1089本基因基因长1089bp，编码362个氨基酸。根据原核基因的特征分析，序列的前3个核苷酸“ATG”(黑体字)为基因的起始密码子；接着，根据三联体密码，推算出该基因的编码氨基酸序列；最后的3个核苷酸“TGA”(黑体字)为基因的终止符；通过BLAST软件分析，该基因推测的编码氨基酸序列如下：MIMANSGATSGWYHDFLETPFTRLVHSKSSKNMLLWINDALMAVFFLLVGLEVKRELMQGSLASLRQAAFPVIAAIGGMIVPALLYLAINYADPITRQGWAIPAATDIAFALGVLALLGSRVPFALKIFMMALAIIDDLGAIIIIALFYTNDLSMASLGLAAVAFAVLAVLNLCGARRTGVYILVGVVLWTAVLKSGVHATLAGVIVGFFIPLKEKHGPSPAKRLEHVLHPWVAYLILPLFAFANAGVSLQGVTLDGLTSILPLGIIAGLLIGKPLGISLFCWLALRLKLAHLPEGTTYQQIMVVGIVCGIGFTMSIFIASLAFGSVDPELINWAKLGILVGSISSAVIGYSWLRVRLRPSV