重组抗原pp65包被酶标反应板的制法及ELISA检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种新的重组抗原pp65包被酶标反应板的制法及ELISA检测试剂盒，其关键技术之处主要在于，用基因工程方法制备特异性重组抗原——HCMV pp65。该抗原在提取纯化后，包板作为试剂盒中的重要组成，另外，通过鼠—鼠杂交瘤技术制备的抗人IgM单克隆抗体，单克隆抗体经辣根过氧化物酶标记后即可用于试剂盒的组装。建立敏感快速的ELISA抗体捕获血清中HCMV特异性IgM抗体的方法，具有高特异性，高稳定性。试剂盒主要供实验室研究和临床诊断使用。

主权项

1、重组抗原pp65包被酶标反应板的制法，通过下列步骤制备而成：(1)、以HCMV AD169 DNA为模板，扩增UL1006-1521nt基因，与克隆表达试剂TOPO-pET连接，转化BL21(DE3)StarTM，表达大量纯化pp65蛋白；(2)、将pp65蛋白抗原用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释后包被96孔板，100μl/孔，置湿盒中4℃ 12～24小时，PBST洗板3次，每次3min，然后拍干；(3)、用含10％小牛血清的PBS加满孔，37℃孵育，封闭1h，洗板3次后密封；该板即为pp65抗原pp65包被酶标反应板，可用于HCMV pp65-IgM的特异性检测用。