| 主权项 |
1.一种利用植物生长调节素加速延胡索药用块茎 组织生长及繁殖之培养方法,包括下列步骤: (1)放置延胡索块茎于成份含有0.5-5.0mg/L的六苯基 胺基嘌呤(benzylaminopurine, BA)与0.5-5.0mg/L的乙酸( -naphthaleneacetic acid, NAA)之培养基中进行暗培养, 以诱导癒合组织; (2)将形成之癒合组织转移至另一添加有玉米素核 醣(zeatine ribosite)之基础MS培养基内,进行另一阶段 之光培养,以诱导胚体形成; (3)将体胚放置于内含0.5-2.0mg/L玉米素核醣(zeatine ribosite)之1/2MS液体培养基,悬浮震荡(100rev/min)并照 光培养二星期,以促使体胚发育成体胚苗; (4)将发育之体胚苗培养于含有浓度生长调节素之1 /2MS培养基中,以促使该体胚苗形成块茎及二次体 胚苗,其中生长调节素系选自离层酸(Abascisic acid, ABA)、巴克素(paclobutrazol)、嘧啶醇(ancymidol)、吉贝 素(Gibberellic acid, GA3)至少一种以上之混合,并进一 步与乙二醇再混合;与 将形成块茎之体胚苗移至含有2%蔗糖、0.18%水晶洋 菜(gelrite)及0.1 mg/L吉贝素(Gibberellic acid, GA3)之1/2MS 培养基中照光培养三星期后,将小苗移植至适当土 壤中,于生长箱中栽培驯化植株; 其中MS培养基包含Murashige and Skoog基本盐类、3%蔗 糖及0.9% Difco Bacto agar,pH为5.70.1; 1/2MS培养基为指MS基本盐类之大量元素减半。 2.如申请专利范围第1项之利用植物生长调节素加 速延胡索药用块茎组织生长及繁殖之培养方法,其 中MS培养基包含成份有: MS基本盐类; 3%蔗糖水溶液; 0.9% Difco Bacto agar; pH=5.70.1; 其中,进一步包含有: 2mg/L六苯基胺基嘌呤(BA,benzylaminopurine); 0.5mg/L乙酸(NAA); 在251℃,暗处理下,于该培养基中培养约一个月。 3.如申请专利范围第1项之利用植物生长调节素加 速延胡索药用块茎组织生长及繁殖之培养方法,该 培养基之成份为1/2MS无机盐、全量之维生素与肌 醇,内含1mg/L玉米素核醣(zeatine ribosite),pH为5.20.1之 液体培养基,于温度251℃下照光培养(光量为38 moL/m2s),时间约两个星期。 4.如申请专利范围第1项之利用植物生长调节素加 速延胡索药用块茎组织生长及繁殖之培养方法,该 步骤(4)中使用之生长素为离层酸(Abascisic acid, ABA) 或巴克素(paclobutrazol),体胚苗之培养时间约为一个 月。 5.如申请专利范围第4项之利用植物生长调节素加 速延胡索药用块茎组织生长及繁殖之培养方法,该 步骤(4)生长素之离层酸(Abascisic acid, ABA)之最佳浓 度为5.0mg/L,而巴克素(paclobutrazol)之最佳浓度为1.0mg /L。 6.如申请专利范围第1项之利用植物生长调节素加 速延胡索药用块茎组织生长及繁殖之培养方法,该 步骤(5)中小苗培育时间约三个星期,小苗移植于生 长箱中驯化植株时间约为一个月。 图式简单说明: 第一图:小苗移植于生长箱中驯化栽培之状态,其 中: 图A:延胡索癒合组织在含1.0 mg L-1玉米素(zeatin)之MS 基本盐类培养基,培养15天后胚体(箭头所指处)形 成。 图B:不同发育时期之胚体,箭头指示依序为:圆形期 、后圆形期、心形期、早子叶期、子叶期及成熟 体胚期。 图C:培养21天之子叶期体胚。 图D:在含1.0mg L-1玉米素(zeatin)之MS基本盐类培养基, 培养5星期后之体胚苗。 图E:图C之体胚苗在含有1.0 mg L-1玉米素(zeatin)之MS 基本盐类培养基,悬浮震荡培养两星期后,形成较 成熟之体胚苗。 图F:较成熟体胚苗在含有6%蔗糖之1/2MS(包含Murashige and Skoog(1962)基本盐类、3%蔗糖及0.9% Difco Bacto agar, pH为5.70.1,以下均简称本培养基为MS基础培养基)基 本盐类培养基培养一个月后,从基部形成块茎。 图G:体胚苗在含有6%蔗糖及0.5 mg L-1离层酸(Abascisic acid, ABA)之1/2MS基本盐类培养基(1/2M基础培养基则 指MS基本盐类之大量元素减半),培养一个月之后之 块茎。 图H:体胚苗在含有6%蔗糖及0.5mg L-1巴克素( paclobutrazol)之1/2MS基本盐类培养基,培养一个月之 后之块茎。 图I:体胚苗在含有6%蔗糖及0.5mg L-1吉贝素(Gibberellic acid, GA3)之1/2MS基本盐类培养基,茎叶丛生但无明 显块茎形成。 图J:体胚苗在含有6%蔗糖及0.5mg L-1离层酸(Abascisic acid, ABA)之1/2MS基本盐类培养基,培养一个月之后, 出现多种不同形状之二次体胚包括(g)圆形期、(h) 心形期、(c)子叶期。 图K:子叶基部直接分化之大量二次体胚。 图L:具有发育良好块茎之体胚苗,转植于含有2%蔗 糖及0.18%水晶洋菜(Gelrite)及0.1mg L-1吉贝素( Gibberellic acid, GA3)之1/2MS基本盐类培养基培养一个 月之情形。 图M:于土壤中驯化培养一个月后之情形。 |
