杂交瘤细胞表达基因工程尿激酶原的制备方法

摘要

本发明提供一种杂交瘤细胞表达尿激酶原的制备方法，该方法中尿激酶原工程细胞株的培养是将尿激酶原工程细胞株先用有血清培养，至细胞密度上升到2－4×10⁵个/毫升后，转入生物反应器内，并降低胎牛血清浓度，待细胞密度上升到2－2.5×10⁶个/毫升后开始无血清灌注培养，通过调节灌注量来始终确保细胞密度不低于1×10⁶个/毫升，并收集培养上清进行纯化。本发明还提供了一种直接采用上述方法中经全无血清灌注培养制得的工程细胞株先进行有血清复苏，然后进行无血清培养，再进行全无血清灌注培养并收集培养上清进行纯化的制备尿激酶原的方法。

主权项

1、一种杂交瘤细胞表达基因工程人糖基化尿激酶原的制备方法，包括：将包含尿激酶原cDNA序列的质粒转染杂交瘤细胞并筛选高表达尿激酶原的杂交瘤细胞工程细胞株；培养尿激酶原工程细胞株；和工程细胞株培养上清的纯化，其特征在于：所述培养尿激酶原工程细胞株是将尿激酶原工程细胞株先用有血清培养基培养至足够量后，转入生物反应器内，接种细胞密度2-4×105个/毫升，随后降低胎牛血清浓度进行低血清培养，待细胞密度上升到2-2.5×106个/毫升后开始无血清灌注培养，通过调节灌注量来始终确保细胞密度不低于1×106个/毫升，并收集培养上清。