| 主权项 |
1、一种采用植物细胞工程生产葛根素的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)诱导离体器官形成愈伤组织：取成熟的种子进行表面消毒，置于湿润滤纸上暗萌发3～5天获得无菌苗，或以健康植株的叶片或茎段为外植体，先用75％乙醇表面消毒30秒，再用0.1～0.2％升汞表面消毒5～15分钟；取无菌苗的叶或经表面消毒的外植体切成小段，放在如下配方的固体培养基中培养10～20天：MS或B5、0.5～2mg/L生长素、0.5～2mg/L细胞分裂素，培养条件为温度(25±2)℃、暗或弱光；(2)愈伤组织的继代培养：将步骤(1)中产生的愈伤组织移入如下配方的继代培养基中进行继代培养：MS或B5、0.5～2mg/L生长素、0.1～1mg/L嘌呤类细胞分裂素、100～400mg/L水解酪蛋白，培养条件同步骤(1)，培养时间为5～8天，期间更换新鲜培养基1～3次；(3)愈伤细胞的悬浮培养：配制如下配方的新液体培养基：MS或B5、0.5～2mg/L生长素、0.1～1mg/L嘌呤类细胞分裂素、1000～5000mg/L水解酪蛋白或100～500mg/L脱乙酰几丁质或0.5～2.0mg/L茉莉酸甲酯；将配制的新鲜培养基与步骤(2)用过的同样成份的液体培养基按体积比2比1混合，取生长良好的愈伤组织，按照1～3g/45ml的密度接种于混合培养基中培养，培养条件为(25±2)℃，在光强5.34μmol·m-·2s-1下全天光照，摇床110±5r/min，培养3～9天，获得所需的葛根素。 |
