| 主权项 |
1.一种利用固定化分枝杆菌细胞脱除汽油中有机硫的方法，其步骤顺序如下：(1)菌种选择：选用分枝杆菌中古的分枝杆菌(Mycobacterium goodii)DSM 44492，草分枝杆菌(Mycobac terium phlei)ATCC 11728之一；(2)斜面培养：将上述菌株接种于含有质量百分比为1.5～2.0％的琼脂糖并加有0.1～1.0mmol/L DBT的MAM固体斜面培养基上，30～50℃培养菌体20～26小时；(3)一级种子培养：将步骤(2)培养的菌体，无菌条件下用接种环接1～4环于20～100mL含有0.1～1.0mmol/LDBT的MAM液体培养基中，30～50℃条件下，在摇床上振荡培养20～26小时，制得一级种子；(4)扩大培养：以体积比为5％的接种量，接一级种子于300～1000mL含有0.1～1.0mmol/LDBT的MAM液体培养基中，30～50℃条件下，在摇床上振荡培养20～26小时，制得二级种子； (5)发酵罐培养：以体积比为5％的接种量，接二级种子于1.8～8L含有0.1～1.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中，30～50℃条件下，培养20～26小时；(6)收集菌体：在5000g条件下离心5～8分钟，收集步骤(5)制得的菌体，并用生理盐水洗涤2～3次；之后用生理盐水悬浮并加入表面活性剂，使表面活性剂的质量百分比浓度为0.05～5％，得菌体细胞；(7)溶解海藻酸钠：用生理盐水配制质量百分比浓度为0.5～3％的海藻酸钠溶液，配制时，剧烈搅拌或在60℃下水浴加热以保证充分溶解；(8)向步骤(7)所得的海藻酸钠溶液中加入质量百分比为0.05～5％的表面活性剂；(9)向步骤(8)所得的溶液中加入步骤(6)所得的菌体细胞，使菌体浓度达到10～30克干细胞/升；(10)用生理盐水配制质量百分比浓度为0.5～5％的CaCl2溶液，并在所得的CaCl2溶液中加入质量百分比为0.05～5％的表面活性剂；(11)将步骤(9)所得的菌体细胞悬浮液，以直径0.2～2mm的液滴滴入步骤(10)所得的溶液中；充分交联0.5～6小时，形成固定化细胞体系；(12)处理样品：在100～1000毫升的反应体系中，以每升25～500克的量加入步骤(11)所得的固定化细胞，作为生物催化剂；加入水相和汽油，使水相和汽油的比例为3～10∶1，在30～45℃条件下，180转/分钟振荡16～28小时，进行样品处理；(13)分离样品：以10,000g离心5～10分钟分离步骤(12)中处理后的样品，得到油相样品；(14)样品检测：取1～5μL步骤(13)中的油相样品，使用WK-2D微机综合动态微库仑分析仪(江苏电分析仪器厂)进行检测，测定汽油中残留的硫含量，得出脱除率。 |
