一种诱导植物系统抗病性的激发子

摘要

本发明从疫霉菌中分离的可以诱导植物系统抗病性的蛋白激发子、制备方法，属于生物技术领域。利用硫酸铵沉淀，获得一种粗的蛋白激发子，通过离子交换色谱和疏水互作色谱等技术对其进行纯化，获得了一种在国内外均未见报道的90kDa蛋白激发子。该激发子可用于诱导烟草和小白菜的系统广谱抗病性。使用浓度为0.1～10nM。防治效果80％以上。

主权项

1、一种诱导植物过敏性反应的激发子，其特征在于：激发子来源于棉花疫霉菌(Phytophthora boehmeriae)，属蛋白类，分子量为10～100kDa，对酸、碱、热稳定；对蛋白酶ProteaseK敏感，N-端氨基酸序列为AVNN，该激发子引起烟草过敏性反应的浓度为0.1-10mM；该激发子的制备方法包括：将棉疫病菌在Plich′s培养液(每升含0.5gKH2PO4，0.25g MgSO4·7H2O，1g天冬酰胺酸，1mg硫胺，0.5g酵母浸膏，20g葡萄糖)中培养10天后，采用双层纱布过滤，再采用双层滤纸过滤，加入硫酸铵至70g/100mL，在4℃过夜，12000g离心10分钟，收集粗蛋白沉淀，用1％体积的Tris.HCl，PH为7.4，悬浮，即为粗蛋白激发子；采用快速蛋白液相色谱FPLC纯化：阴离子交换色谱，色谱柱SepharoseQFF，流动相：A，20mmol/L Tris.HCl pH6.0；B，A+1mol/L NaCl；流速：2.5ml/min，30min梯度洗脱，收集活性峰：将不同收集管中的蛋白溶液分别脱盐后，稀释100倍，注射烟草，能引起烟草细胞过敏性坏死反应的组分，就收集起来做进一步纯化；疏水相互作用色谱，色谱柱：Sepharose PHE HP；流动相：A，0.8mol/L硫酸铵20mmol/LTris.HCl pH6.0；B，MiliQ水；流速：1.5ml/min，梯度洗脱，收集活性峰(方法同上)，透析后冻干浓缩制成纯品。